區(qū)域草魚呼腸孤病毒引發(fā)出血病的風險評估研究.pdf

1、草魚出血病是一種發(fā)病率高、致死率高、嚴重危害當年草魚種及二齡草魚的病毒性疾病，其病原為草魚呼腸孤病毒。引發(fā)草魚出血病的因素很多，為了消除或降低該病發(fā)生的可能性或者減少其發(fā)生時造成的損失，本研究以江西省南昌市及周邊地區(qū)為基點，從該地區(qū)草魚出血病病原的分離與鑒定著手，通過調查該地區(qū)草魚出血病流行情況、實驗室模擬試驗確定該病發(fā)生風險因素，借助層次分析法明確不同風險因素對該病發(fā)生的權重值，即要確定不同風險的優(yōu)先次序或等級，最后利用綜合評分法建立

2、該病發(fā)生風險模型。
　　 1.收集江西南昌地區(qū)患典型草魚出血病的病魚組織，進行超薄切片電鏡觀察，結果顯示，在脾、腎樣品中發(fā)現大量病毒顆粒，病毒無囊膜，近球形，直徑約70nm，形態(tài)與已報道的草魚呼腸孤病毒(GrassCarpReovirus，GCRV)相似。取病魚肌肉、內臟研磨，組織液經離心、過濾除菌后進行魚體人工感染試驗和細胞感染實驗。結果發(fā)現，人工感染試驗魚出現死亡，且具有典型出血癥狀；組織濾液感染草魚腎臟細胞(CIK)后，盲

3、傳六代未觀察到典型細胞病變效應，但感染細胞固定后經超薄切片電鏡觀察，細胞質內有大量病毒存在，與病魚組織切片觀察到的病毒形態(tài)一致。十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結果進一步揭示，新分離病毒株(暫命名JX-0902)基因組由11條dsRNA組成，呈現水生呼腸孤病毒基因組典型特征，但基因組帶型與GCRV873株存在差異，而與HZ08株接近。根據GenBank上己提交的草魚呼腸孤病毒S6序列(GQ896337)設計特異引物

4、，以JX-0902株的cDNA作為模板，可擴增出特異性條帶。S6序列聚類分析結果顯示，JX-0902與GCRVHZ08株、GD108株S6同源性高達98％、99％，該分離株應為草魚呼腸孤病毒。
　　 2.為了確定江西南昌地區(qū)草魚出血病發(fā)生的風險因素，本人采用調查問卷及定點觀測的方法對南昌及周邊地區(qū)進行了流行病學調查。結果發(fā)現：
　　 (1)無論是當年草魚種，還是二齡草魚，未免疫池塘發(fā)病率均遠高于免疫池塘。
　　

5、(2)從時間分布上看，草魚出血病一般發(fā)生在5月～10月份，早的發(fā)生于四月下旬，晚的會持續(xù)到11月上旬。從風險主體上看，二齡草魚從5月份開始發(fā)生出血病，溫度在25℃左右，集中在6、7月份，30℃以上呈暴發(fā)狀態(tài)；一齡草魚從7月中下旬開始發(fā)生，溫度在30℃以上，集中在8、9月份，10月份常與細菌性爛鰓病并發(fā)。
　　 (3)草魚出血病一般發(fā)生在體長在7～15cm規(guī)格的草魚上，集中在9～12cm規(guī)格的草魚上。
　　 (4)水體理化

6、因子溶氧、分子態(tài)氮、亞硝酸鹽、透明度、pH等與出血病有密切的關系。出血病是這些因子綜合作用的結果。分子態(tài)氮、亞硝酸鹽、溶氧、透明度、pH值等的變化將影響出血病的發(fā)生遲早、病情輕重和流行期長短。
　　 (5)出血病與池塘使用年限及養(yǎng)殖模式也有關系。使用年限較長(如10年)、養(yǎng)殖密度較高、草魚占混養(yǎng)比例較大，高溫季節(jié)投料過多，患出血病的可能性較大。
　　 3.為了明確一些因素如草魚體長、溫度、水質指標等不同水平對出血病病情的

7、影響，本文設計了相應的模擬試驗，利用最小顯著極差法(LSR法)進行了統計分析，主要試驗結果如下：
　　 (1)草魚呼腸孤病毒JX-0902(組織漿液)感染不同規(guī)格的受試草魚時，受試草魚的平均病程及死亡率有極顯著差異，病情隨體長的增加而減輕，按死亡率由高到低排列，依次為(9±0.5)cm、(11±0.7)cm、(13±0.7)cm、(15±0.7)cm。
　　 (2)利用四種形式的毒源：GCRV873細胞液、HZ08細胞液

8、、JX-0902細胞液、JX-0902組織漿液對體長(12±1)cm的草魚進行攻毒試驗，僅JX-0902組織漿毒試驗組出現死亡。
　　 (3)以一定的濃度梯度進行攻毒試驗，濃度低的試驗組病程較長，死亡率較低。
　　 (4)用毒株來源及濃度不同的疫苗免疫試驗草魚，以JX-0902組織漿液進行人工感染試驗，發(fā)現同源性較高的毒株的免疫效果最好，疫苗濃度較低時，免疫效果較差。
　　 (5)溫度對受試草魚病情影響達極顯著水

9、平(P<0.01)，試驗組死亡率有高到低依次是(30±1)℃、(34±1)℃、(26±1)℃、(22±1)℃，(18±1)℃。對照組未出現死亡。
　　 (6)變溫試驗證明在一定溫度范圍內升高溫度能加劇病情，降低溫度可以緩解病情。
　　 (7)水質因子試驗證明溶氧水平對出血病病情影響極顯著；pH對病程沒有顯著影響，但對死亡率有顯著影響，以中性偏酸性水質死亡率最高：分子態(tài)氨氮對出血病病情影響顯著(P<0.05)；亞硝酸鹽對出

10、血病病情影響不顯著(P>0.05)。
　　 4.本文利用層次分析法(AHP)建立了草魚養(yǎng)殖過程中出血病發(fā)生的風險指標體系：免疫預防措施、氣溫、飼料的質與量、氣溫變化、魚種規(guī)格、溶氧、池塘深度、分子態(tài)氨氮、亞硝酸鹽、酸堿度、透明度。根據文獻信息、調查資料，模擬試驗數據對風險因子不同水平進行賦值并確定了各指標相對于出血病發(fā)生風險的權重：0.425、0.216、0.113、0.072、0.049、0.044、0.036、0.020、0