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文檔簡介
1、目的:胰島素抵抗(IR)是非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理生理基礎(chǔ),改善肝臟IR對防治NAFLD起著至關(guān)重要的作用。大黃素和小檗堿分別是中藥大黃和黃連的主要有效成分,具有改善IR的作用。本研究旨在探討高濃度的游離脂肪酸(FFA)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞為IR的機(jī)制以及大黃素和小檗堿對IR的改善作用,為防治NAFLD提供新的理論依據(jù)。 方法:用高濃度的FFA培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,誘導(dǎo)為IR的細(xì)胞模型,測定培養(yǎng)液中葡萄糖濃度及細(xì)胞內(nèi)糖原含
2、量作為模型鑒定指標(biāo);四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)分別檢測大黃素和小檗堿的最適藥物濃度;逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)方法檢測各組細(xì)胞中脂聯(lián)素受體2(AdipoR2)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的mRNA表達(dá)。 結(jié)果:(一)MTT實(shí)驗(yàn)顯示:濃度為10μmol/L大黃素時的細(xì)胞存活率為92.5%。濃度為10μmol/L幾小檗堿時的細(xì)胞存活率為90.3%,故選擇10μmol
3、/L為大黃素和小檗堿的工作濃度。 (二)預(yù)防組1.IR模型組培養(yǎng)液中葡萄糖含量較正常組明顯升高(P<0.01),當(dāng)同時加入中藥和FFA后即:大黃素(10μmol/L)+FFA組、小檗堿(10μmol/L)+FFA組培養(yǎng)液中葡萄糖含量較模型組顯著降低,與正常組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.IR模型組細(xì)胞內(nèi)糖原含量較正常組明顯降低(P<0.01);而大黃素+FFA組、小檗堿+FFA組細(xì)胞內(nèi)糖原含量顯著高于模型組,與正常組比較無統(tǒng)計(jì)
4、學(xué)差異。 3.正常HepG2細(xì)胞可表達(dá)AdipoR2、PPARγ、PEPCK。IR模型組較正常組AdipoR2、PPARγmRNA表達(dá)減少,PEPCKmRNA表達(dá)增高(P<0.01),而大黃素+FFA組、小檗堿+FFA組AdipoR2、PPARγmRNA表達(dá)增高,PEPCKmRNA表達(dá)減少。 (三)治療組1.IR的模型組培養(yǎng)液中葡萄糖含量以及PEPCKmRNA表達(dá)明顯高于正常對照組(P<0.01),細(xì)胞內(nèi)糖原含量、Adi
5、poR2mRNA、PPARγmRNA表達(dá)顯著減少(P<0.01)。 2.培養(yǎng)液中分別加入大黃素(10μmol/L)、小檗堿(10μmol/L)、吡格列酮(10μmol/L)后,可明顯改善IR。表現(xiàn)為:培養(yǎng)液中葡萄糖含量及PEPCKmRNA表達(dá)較IR模型組顯著降低,而細(xì)胞內(nèi)糖原含量、AdipoR2mRNA、PPARγmRNA表達(dá)升高。且以上三組分別與正常組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.01)。 結(jié)論:高濃度的FFA培養(yǎng)Hep
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