藥物干預胰島素抵抗HepG2細胞模型的蛋白質組學研究.pdf

1、目的：用比較蛋白質組學策略篩選增敏劑藥物蛻皮甾酮/羅格列酮干預胰島素抵抗HepG2細胞模型前后的差異表達蛋白，為尋找藥物作用靶點提供新的實驗依據。 方法 將HtepG2細胞置于5×10<'-7>mol/L胰島素培養(yǎng)液中誘導16h，建立胰島素抵抗細胞模型，以葡萄糖氧化酶．過氧化物酶(GOD-POD)法檢測胰島素抵抗和非抵抗細胞對葡萄糖的攝取能力，以判斷抗性細胞模型的形成。在此基礎上，用胰島素增敏劑羅格列酮和蛻皮甾酮分別

2、干預胰島素抵抗細胞模型24h，用裂解液提取藥物干預前后各組細胞的蛋白質，以雙向電泳技術對干預前后差異表達蛋白進行篩選，差異表達蛋白再經MALDI-TOF-MS質譜分析，MS-Fit數據庫鑒定。 結果 1．體外高胰島素誘導成功建立胰島素抵抗細胞模型，GOD-POD法檢測胰島素抵抗組培養(yǎng)基中葡萄糖的含量明顯高于對照組，羅格列酮治療組葡萄糖較胰島素抵抗組明顯減少。 2．雙向電泳技術篩選出羅格列酮干預前與干預后胰島

3、素抵抗HepG2細胞的差異蛋白質36個，22個蛋白質在羅格列酮干預后表達上調，14個蛋白質干預后表達下調；蛻皮甾酮干預前與干預后IRHepG2細胞的差異蛋白質53個，有35個蛋白質在蛻皮甾酮干預后表達上調，18個蛋白質干預后表達下調。 3．經MALDI-TOF-MS質譜分析，MS-Fit數據庫鑒定，羅格列酮干預前后差異表達較明顯的6個蛋白質(其中有3個上調蛋白，3個下調蛋白)經 MALDI-TOF-MS質譜分析，MS-Fit數

4、據庫鑒定，它們分別是：Lipin-1、ANG-4、Chondroitin sulfate glucuronyltransferase、CPT-I、C3/C5 convertase及HSP-70.蛻皮甾酮干預前后的6個差異蛋白質(其中有3個上調蛋白，3個下調蛋白)經MALDI-TOF-MS質譜分析，MS-Fit 數據庫鑒定，他們分別是：Tyrosine-protein kinase、Phosphatidylinositol-binding

5、 clathrin assembly protein、LIMdomain-binding protein 2、Phosphoenolpyruvate carboxykinase、Proteasome subunit alpha type 5及Zinc finger protein 483。 結論 1．體外高胰島素誘導成功建立了胰島素抵抗HepG2細胞模型。 2．獲得了理想的藥物干預前后胰島素抵抗HepG2細