乙肝表面抗原誘導(dǎo)的miRNAs抑制肝癌細胞中MICA的表達.pdf

1、乙肝表面抗原(HBsAg)陽性是肝癌的一個重要的危險因素，已有報道說HBsAg的轉(zhuǎn)基因小鼠可自發(fā)肝癌。流行病學上，乙型肝炎病毒與肝癌的發(fā)生有著某種關(guān)聯(lián)是公認的。近幾年來研究表明，miRNA與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，研究其與腫瘤的關(guān)系已經(jīng)成為熱點。在本研究中，主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)分子A(MICA)是NKG2D的配體，在腫瘤的免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要的作用。HBsAg的過表達可以使MICA的表達可以顯著地減少，這種抑制可以被部分修復(fù)，通過抑

2、制HBsAg誘導(dǎo)的miRNA的活動。我們通過生物信息學的研究發(fā)現(xiàn)，在過表達HBsAg的HepG2細胞系中，133個miRNAs是上調(diào)的，9個miRNAs是下調(diào)的。此外，過表達乙肝表面抗原的肝癌細胞，表現(xiàn)出對自然殺傷細胞介導(dǎo)的細胞溶解作用的敏感性降低。綜上所述，我們的數(shù)據(jù)表明，乙肝表面抗原是通過誘導(dǎo)細胞內(nèi)miRNA的表達來抑制MICA的表達，從而阻止NKG2D介導(dǎo)的清除肝癌細胞的活動。
　　目的:構(gòu)建穩(wěn)定表達HBsAg的細胞系，驗證

3、受HBsAg調(diào)節(jié)的miRNAs，并深入研究其在肝癌形成中的作用機制。
　　方法:
　　(1)構(gòu)建過表達HBsAg的肝癌細胞系，通過ELISA及western鑒定。
　　(2)實時熒光定量PCR檢測穩(wěn)定過表達HBsAg的肝癌細胞系中miRNAs及MICA mRNA表達水平。
　　(3)雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞C肝癌中miRNAs對MICA3'-UTR的作用。
　　(4)流式細胞術(shù)檢測細胞表面MICA的蛋白表達

4、水平。
　　(5) NK細胞殺傷實驗檢測細胞的免疫逃逸清除能力。
　　結(jié)果:
　　(1)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達HBsAg的肝癌細胞系。
　　(2)測序分析篩選出的miRNAs中，可能會調(diào)節(jié)MICA基因表達的miRNAs在HBsAg過表達HepG2和Huh7肝癌細胞系中上調(diào)。
　　(3)HBsAg誘導(dǎo)的miRNAs下調(diào)肝癌細胞中MICA的表達。
　　(4)與對照相比，miRNAs抑制劑部分恢復(fù)HBsAg過表