一種乙肝表面抗原結(jié)合蛋白(SBP)在Pichia Pastoris中的表達,純化工藝及功能研究.pdf

1、乙型肝炎(hepatitis B,HB)是世界范圍內(nèi)流行的一種嚴重危害人類健康的疾病,由乙型肝炎病毒(HBV,hepatitis B virus)引起.我國是乙肝高流行區(qū),大約有1.12億人慢性感染HBV,占全世界感染者的30％以上.乙肝疫苗是預防感染乙型肝炎和降低乙肝病毒攜帶率的最有效措施.但是,5-10％的個體在按標準程序接種乙肝疫苗后不能產(chǎn)生足夠的抗體以抵抗乙肝病毒的感染.
　　 HBsAg-BP(Hepatitis B

2、surface antigen binding protein,SBP)是本室以血清來源的乙肝表面抗原(HBsAg)為探針,通過印跡免疫技術(shù)從人肝cDNA噬菌體表達庫中篩選獲得,其特征是可以與乙肝表面抗原HBsAg特異性的相互作用.在本室前期的研究工作中,我們構(gòu)建了原核表達載體pBV-SBP,用E.coli大量表達重組SBP,并證實其具有增強乙肝疫苗免疫效果的作用.
　　 本文將SBP表達框克隆到在畢赤酵母表達載體pPICZαA

3、中,通過電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌株GS115,獲得能夠分泌表達SBP的GS115轉(zhuǎn)化菌株;對培養(yǎng)工藝進行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)SBP表達菌株在pH為6.0,誘導劑甲醇濃度為1.0-1.5％的BMMY中誘導96小時,達到最佳表達水平,可以加入終濃度為50μg/ml的Amp和15μg/ml的Kan以防止染菌及2mM的EDTA以抑制降解且不影響蛋白表達;在最優(yōu)條件下誘導表達SBP并收集培養(yǎng)液,通過超濾和親和層析的方法純化獲得了一定量的重組SBP蛋白,ELI