ING4和HIF-la在人腦星形細(xì)胞瘤中表達(dá)的研究.pdf

1、背景與目的
　　 星形細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中常見的神經(jīng)上皮組織腫瘤，惡性程度高，不易手術(shù)徹底切除，預(yù)后較差。隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到腫瘤的形成與很多因素有關(guān)，如正常的細(xì)胞周期失控、腫瘤新生血管的形成、腫瘤內(nèi)部缺氧環(huán)境的耐受以及細(xì)胞接觸抑制的喪失等。癌基因的激活和抑癌基因的失活在腫瘤的形成中起到了關(guān)鍵性的作用，多種細(xì)胞因子參與這一過程。ING4（inhibitor of growth4）是近年來發(fā)現(xiàn)的生長抑制因子家

2、族中的一位新成員，它在調(diào)控細(xì)胞周期、促使細(xì)胞凋亡、抑制血管的生成和恢復(fù)細(xì)胞間的接觸抑制中起著重要的作用，是一個(gè)重要腫瘤的生長抑制因子。腫瘤內(nèi)部的普遍缺氧環(huán)境可以引起缺氧誘導(dǎo)因子-1a(hypoxia induciblefactor-1a，HIF-1a)表達(dá)活性增強(qiáng)，HIF-1a可以促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，改善腫瘤內(nèi)部缺氧的狀態(tài)，平衡腫瘤細(xì)胞對氧的需求，促進(jìn)腫瘤的增殖和侵襲。二者的異常表達(dá)均與腫瘤的惡性生物學(xué)行為關(guān)系密切。有研究發(fā)現(xiàn)，IN

3、G4可以通過抑制HIF-1a的活性，來減少IL-8的生成，從而抑制腫瘤血管的形成。這一過程中具體的作用機(jī)制尚未完全清楚。本課題采用免疫組化和RT-PCR方法檢測ING4和HIF-1a在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況，探討它們在星形細(xì)胞瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用，與病理學(xué)分級的關(guān)系以及二者之間的相關(guān)聯(lián)系。并為臨床工作提出指導(dǎo)性意見，為星形細(xì)胞瘤的診治及預(yù)后判斷提供新的思路。
　　 材料與方法
　　 研究對象為2009年1月至2009年9

4、月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的45例星形細(xì)胞瘤標(biāo)本。所有病例均為原發(fā)病例，術(shù)前未經(jīng)放射治療和化療。一部分標(biāo)本經(jīng)10％中性福爾馬林液固定，石蠟包埋；另一部分標(biāo)本迅速放入液氮罐內(nèi)，后放入-80℃冰箱內(nèi)保存。按照2000年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，把24例Ⅰ～Ⅱ級標(biāo)本設(shè)為低度惡性實(shí)驗(yàn)組，21例Ⅲ～Ⅳ級設(shè)為高度惡性實(shí)驗(yàn)組，11例非瘤腦組織為對照組。非瘤腦組織取自腦外傷、腦出血患者內(nèi)減壓者。先采用免疫組化法檢測ING4蛋白和HIF

5、-1a蛋白在11例非瘤腦組織和45例星形細(xì)胞瘤標(biāo)本的表達(dá)情況，在此基礎(chǔ)上，又采用RT-PCR檢測ING4基因和HIF-1a基因的mRNA在11例非瘤腦組織和45例星形細(xì)胞瘤標(biāo)本的表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取a=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫組化染色結(jié)果：ING4蛋白在非瘤腦組織均見表達(dá)(100％)，明顯高于星形細(xì)胞瘤中的陽性表達(dá)率(42.2％)，且在Ⅰ～Ⅱ級組中的陽性表達(dá)率(58.3％

6、)高于Ⅲ～Ⅳ級組的陽性表達(dá)率(23.8％)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均存在著顯著性差異(P＜0.05）。HIF-1a蛋白在非瘤腦組織中未見表達(dá)(0)，明顯低于星形細(xì)胞瘤中的陽性表達(dá)率(71.1％)，且在Ⅰ～Ⅱ級組中的陽性表達(dá)率(54.2％)低于Ⅲ～Ⅳ級組的陽性表達(dá)率(90.5％)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 2.RT-PCR檢測結(jié)果：ING4基因在非瘤腦組織、星形細(xì)胞瘤、Ⅰ～Ⅱ級組和Ⅲ～Ⅳ級組中mRNA的表達(dá)量分別1.19±0

7、.22、0.62±0.34、0.78±0.27和0.43±0.32，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，ING4基因mRNA的表達(dá)量在非瘤腦組織和星形細(xì)胞瘤之間，Ⅰ～Ⅱ級組和Ⅲ～Ⅳ級組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HIF-1a基因在非瘤腦組織、星形細(xì)胞瘤、Ⅰ～Ⅱ級組和Ⅲ～Ⅳ級組中mRNA的表達(dá)量分別0.26±0.16、0.70±0.33、0.46±0.23和0.98±0.15，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，HIF-1a基因mRNA的表達(dá)量在非瘤腦組織和星形細(xì)胞瘤之間，Ⅰ～

8、Ⅱ級組和Ⅲ～Ⅳ級組之間均存在著顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.相關(guān)性分析：在ING4基因mRNA表達(dá)量較高的低級別星形細(xì)胞瘤標(biāo)本中，HIF-1a表達(dá)量趨向于減少，而在ING4基因mRNA表達(dá)量較低高級別星形細(xì)胞瘤標(biāo)本中，HIF-1a表達(dá)量趨向于增多，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，二者呈中度負(fù)相關(guān)，Pearson相關(guān)系數(shù)為-0.553（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.ING4在星形細(xì)胞瘤中表達(dá)下降或者缺失，隨著病