腺病毒介導(dǎo)的ING4及IL-24基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑制生長和侵襲遷移及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的:
　　 通過在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)ING4及IL-24基因,觀察人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖及遷移變化,并進(jìn)一步探討影響其增殖及遷移變化的機(jī)制。
　　 研究方法:
　　 (1)用Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體感染人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251,通過熒光顯微鏡觀察腺病毒的感染效率,并通過RT-PCR法檢測ING4及IL-24的轉(zhuǎn)錄水平。
　　 (2)MTT法、流式細(xì)胞儀檢測ING4及IL-24對(duì)

2、U251細(xì)胞增殖的影響。
　　 (3)通過單層創(chuàng)傷模型、Boyden Chamber試驗(yàn)來檢測ING4和IL-24對(duì)U251細(xì)胞的侵襲及遷移影響。
　　 (4)Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體感染U251后,通過免疫印跡方法檢測抑癌基因NGF、TrkA的表達(dá)水平,并分析其影響U251細(xì)胞增殖的可能機(jī)制。
　　 (5)Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體感染U251后,通過pull-down

3、 assay檢測活性RhoA表達(dá),并分析其影響U251細(xì)胞的侵襲及遷移的可能機(jī)制。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體轉(zhuǎn)染U251后,熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白(GFP蛋白),發(fā)現(xiàn)腺病毒的感染效率可達(dá)95％,RT-PCR結(jié)果顯示Ad-ING4組及Ad.IL-24組出現(xiàn)高表達(dá)電泳條帶,而腺病毒空載體組則未出現(xiàn)電泳條帶,表明Ad-ING4,Ad.IL-24基因均轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞成功。

4、
　　 (2)MTT結(jié)果顯示Ad-ING4及Ad.IL-24明顯抑制了U251細(xì)胞的增殖,且流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn)Ad-ING4處理組較對(duì)照組S期明顯縮短,Ad.IL-24處理組較對(duì)照組G2/M期明顯延長,表明Ad-ING4及Ad.IL-24均明顯抑制了U251細(xì)胞的增殖。
　　 (3)通過單層創(chuàng)傷模型、Boydcn Chamber試驗(yàn)顯示ING4和IL-24均能明顯抑制U251細(xì)胞的侵襲及遷移。
　　 (4

5、)免疫印跡結(jié)果顯示過表達(dá)ING4,IL-24的U251細(xì)胞中NGF及TrkA表達(dá)降低。
　　 (5)pull-down aussay檢測發(fā)現(xiàn)Ad-ING4及Ad.IL-24處理組較對(duì)照組均明顯降低活性RhoA的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 Ad-ING4及Ad.IL-24可以抑制U251細(xì)胞的增殖及遷移,并且發(fā)現(xiàn)過表達(dá)ING4,IL-24基因抑制了U251細(xì)胞中癌基因NGF及TrkA的表達(dá),且降低了RhoA的活性,