腺病毒介導(dǎo)ING4基因抑制大腸癌細(xì)胞增殖及其分子機制.pdf

1、目的:探討腺病毒介導(dǎo)ING4基因抑制大腸癌細(xì)胞增殖及其分子機制。
　　方法:采用重組腺病毒載體ING4(Ad-ING4)感染QBI-293A細(xì)胞,進行病毒擴增和效價測定。RT-PCR鑒定Ad-ING4基因在QBI-293A細(xì)胞和SW1116大腸癌細(xì)胞中的有效表達。體外實驗分5組:細(xì)胞對照PBS組(PBS組)、空載體腺病毒組(Ad-GFP組)、Ad-ING4基因治療組(Ad-ING4組)、紫杉醇對照組(PTX組)和Ad-ING4+P

2、TX組(聯(lián)合組)。Western blot鑒定ING4蛋白表達,檢測STAT3、磷酸化的STAT3(pSTAT3)及Ki-67的表達,MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測Ad-ING4對SW1116大腸癌細(xì)胞生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。體內(nèi)實驗分組同體外實驗,采用SW1116大腸癌細(xì)胞株建立人大腸癌裸鼠移植瘤模型,使用瘤體局部多點注射用藥,動態(tài)測量腫瘤體積,并計算抑瘤率,HE染色法觀察瘤體細(xì)胞形態(tài),免疫組化染色檢測相關(guān)蛋白的表達:ING4、STAT3、

3、pSTAT3及Ki-67。
　　結(jié)果:1,Ad-ING4可在QBI-293A細(xì)胞中增殖,病毒效價檢測為(1-2)×109pfu/ml。2,Ad-ING4感染SW1116細(xì)胞后,RT-PCR和Western blot均檢測到ING4表達。體外實驗顯示Ad-ING4能明顯抑制人SW1116大腸癌細(xì)胞生長和誘導(dǎo)凋亡,Western blot顯示Ad-ING4組、PTX組及聯(lián)合組能引起SW1116細(xì)胞pSTAT3、Ki-67明顯下調(diào),與P

4、BS組、Ad-GFP組相比具有顯著差異(P<0.05),STAT3蛋白表達不變。3,體內(nèi)實驗顯示Ad-ING4顯著抑制大腸癌裸鼠移植瘤的生長,與PBS組、Ad-GFP組相比具有明顯的抑制作用(P<0.05),且聯(lián)合組對上述的作用較Ad-ING4組、PTX組更為顯著。Western blot顯示Ad-ING4組、PTX組及聯(lián)合組能使腫瘤組織中pSTAT3、Ki-67明顯下調(diào),與PBS組、Ad-GFP組相比具有顯著差異(P<0.05),ST

5、AT3蛋白表達不變。免疫組化染色顯示Ad-ING4組、PTX組及聯(lián)合組瘤體組織中pSTAT3、Ki-67陽性表達下降,STAT3蛋白陽性率不變。
　　結(jié)論:1,Ad-ING4體內(nèi)外可抑制SW1116大腸癌細(xì)胞和大腸癌裸鼠移植瘤生長和誘導(dǎo)凋亡,具有抑瘤效應(yīng)。2,Ad-ING4具有下調(diào)pSTAT3、Ki-67蛋白表達的效應(yīng),這可能是Ad-ING4具有抑癌效應(yīng)的重要機制之一。3,Ad-ING4聯(lián)合PTX對體內(nèi)外SW1116大腸癌細(xì)胞和大