復發(fā)性鼻息肉分子標志物篩選及其意義.pdf

1、第一章用功能分類基因芯片技術研究鼻息肉組織中JAK-STAT、NF-κΒ和MAPK信號通路中的分子標志物
　　 目的:應用功能分類基因芯片技術研究復發(fā)性鼻息肉組織的相關基因,并探討其在鼻息肉發(fā)病和復發(fā)中的作用。
　　 方法:分別抽提檢測10例鼻息肉組織、10例復發(fā)性鼻息肉組織、10例慢性鼻竇炎組織和10例正常鼻黏膜組織的總RNA,合成cDNA,在標準96孔PCR反應儀中進行實時定量PCR實驗,用掃描儀掃描芯片熒光信號,用

2、2-△△Ct計算JAK-STAT信號通路、MAPK信號通路和NF-κΒ信號通路中實驗組與對照組對應基因的表達差異。為了驗證這些發(fā)現的可重復性,同時也為了檢驗我們建立的實驗體系的可靠性,我們嚴格按照第一次實驗的設計,重復進行了第二次實驗。
　　 結果:兩次實驗共得出與正常對照組比較上調2倍以上的差異基因14個,其中JAK-STAT信號通路9個、MAPK信號通路2個,NF-κΒ信號通路3個。在差異表達的基因中,主要包括信號轉錄與轉導

3、激活因子、轉錄因子、細胞因子信號轉導抑制因子、表皮生長因子相關因子、細胞周期調節(jié)因子、補體因子等。其中可能反映鼻息肉復發(fā)狀態(tài)的基因7個;可能反映鼻息肉狀態(tài)的基因4個;可能反映鼻黏膜炎癥狀態(tài)的基因1個。
　　 結論:用功能分類基因芯片篩選鼻息肉、復發(fā)性鼻息肉、慢性鼻竇炎和正常鼻黏膜組織間存在的差異基因是可行的,這將為尋找鼻息肉分類和預后評估的客觀實驗室指標提供新的方法。
　　 第二章細胞周期蛋白D1.和抑瘤素M在復發(fā)性鼻息

4、肉組織中的表達及意義
　　 目的:檢測細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和抑瘤素M(OncostatinM,OSM)蛋白在復發(fā)性鼻息肉、鼻息肉、慢性鼻竇炎及正常中鼻甲黏膜組織中的表達程度的差異,探討其在復發(fā)性鼻息肉發(fā)病機制中的作用。
　　 方法:采用蛋白質印跡法分別檢測6例復發(fā)性鼻息肉、6例鼻息肉、6例慢性鼻竇炎及6例正常中鼻甲黏膜組織中Cyclin D1和OSM的蛋白表達;免疫組織化學技術檢測6例復發(fā)性鼻息肉、6例

5、鼻息肉、6例慢性鼻竇炎及6例正常中鼻甲黏膜組織中Cyclin D1蛋白的表達及定位,并比較表達程度的差異。
　　 結果:(1)免疫組化顯示Cyclin D1蛋白在復發(fā)性鼻息肉、鼻息肉、慢性鼻竇炎及正常中鼻甲黏膜組織中均有表達,Cyclin D1蛋白主要位于鼻黏膜上皮細胞和腺上皮細胞的細胞核,黃色或棕黃色染色為陽性。蛋白質印跡顯示Cyclin D1蛋白和OSM蛋白在復發(fā)性鼻息肉、鼻息肉及慢性鼻竇炎組織中的表達均高于正常中鼻甲黏膜組