雷公藤多甙抗急性移植物抗宿主病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:異基因骨髓移植與外周血干細(xì)胞移植是許多血液、遺傳病及惡性腫瘤放、化療后的重要治療手段,它為患者提供了長期緩解或根治的機(jī)會.移植后,產(chǎn)生的移植物抗宿主病(Graft-Versus-Host Disease,GVHD)特別是aGVHD(acute Graft-Versus-Host Disease,aGVHD)是主要的并發(fā)癥.因此,預(yù)防和治療aGVHD是當(dāng)前骨髓移植急待解決的課題之一.方法:一、動物模型復(fù)制;供鼠BALB/C(H-2<

2、'd>)雌性;同基因移植受鼠BALB/C(H-2<'d>)雄性;異基因移植受鼠C<,57>BL/6(H-2<'b>)雄性.各組小鼠均為8~12周齡,體重20g左右.骨髓移植當(dāng)天頸椎脫臼法處死供鼠,在超凈臺內(nèi)無菌取供鼠脾臟及雙側(cè)股骨骨髓,0℃下將脾臟在尼龍網(wǎng)上研磨過濾制成細(xì)胞懸液,用淋巴細(xì)胞分層液分離脾淋巴細(xì)胞,用RPMI1640液調(diào)脾淋巴細(xì)胞濃度為2X10<'7>/ml.同時(shí),剪開股骨干髓端,用6號半針頭,吸入一定量RPMI1640液,

3、沖出骨髓液,反復(fù)3次,而后通過4號針頭3次,使其成為單細(xì)胞懸液,調(diào)骨髓細(xì)胞濃度為4×10<'6>/Ml.將脾細(xì)胞與骨髓細(xì)胞按體積1:1混合,制成混合細(xì)胞懸液(BMC).受鼠在骨髓移植前24h內(nèi)應(yīng)用直線加速器全身照射,總劑量為1800cGy,劑量率為200Gy/min,將制成的混合細(xì)胞懸液經(jīng)尾靜脈輸給受鼠BALB/C(同基因移植)與受鼠C<,57>BL/6(異基因移植).每只輸入0.5ml,含骨髓細(xì)胞1xl0<'6>個(gè),脾淋巴細(xì)胞5x10

4、<'6>個(gè),制成aGVHD模型.二、實(shí)驗(yàn)分組及處理;移植后將受鼠隨機(jī)分成5組,同基因移植組,異基因移植組,CsA +MTX組,GTT組,GIT+CsA組.于無菌室內(nèi)飼養(yǎng),食料及水均高壓滅菌,飲水中加入慶大霉素(320mg/L)、紅霉素(250mg/L).從移植當(dāng)日起,同基因移植組與異基因移植組受鼠,每日腹腔注射生理鹽水0.2ml,CsA+MTX組受鼠,每日腹腔注射CsA2.5mg/kg,第1、3、5、9天腹腔注射MTX7mg/M<'2>

5、.GTT組受鼠每日腹腔注射GTT(5mg/kg).GTT+CsA組受鼠每日腹腔注射GTT2.5mg/kg、CsA2.5mg/kg,GTT用吐溫80溶解制成lmg/ml的GTT注射液.骨髓移植第11天處死各組受鼠,檢測各項(xiàng)指標(biāo).結(jié)論:1.雷公藤多甙可提高aGVHD小鼠的生存率,并減輕aGVHD的組織器官損傷,具有明顯的抗aGVHD作用.2.雷公藤多甙的抗aGVHD的作用可能與其下列作用有關(guān):(1)雷公藤多甙可減少aGVHD時(shí)小鼠的局部靶器

6、官組織CD<,3><'+>CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞的浸潤及其粘附分子CD<,11α>、CD<,18>的表達(dá).(2)雷公藤多甙可降低aGVHD小鼠的全身免疫功能,即降低脾T淋巴細(xì)胞、亞群數(shù)量及其表面粘附分子CD<,11a>/CD<,18>的表達(dá).(3)雷公藤多甙可上調(diào)對aGVHD有抑制作用的細(xì)胞因子IL-4、IL-10及其mRNA的表達(dá);下調(diào)對aGVHD有促進(jìn)作用的細(xì)胞困子IL-2、TNFa及其mRNA的表達(dá).