雷公藤多甙防治大鼠EAE療效及機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察雷公藤多甙(tripterygium wifordii polyglycosidium，TWP)對Wistar大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis，EAE)干預(yù)的影響，比較兩組不同劑量T聊與潑尼松(prednisone，PRD)的療效差別，探討其可能的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法：用豚鼠脊髓勻漿(guinea pig spinal cord homoge

2、nate，GP-SCH)+完全福氏佐劑(complete freund's adguvant，CFA)+百日咳疫苗原漿液(pertussis vaccine，PV)致敏Wistar大鼠，建立EAE模型。并選用TWP、PRD干預(yù)治療。65只Wistar大鼠隨機(jī)分成5組：對照組5只(用生理鹽水代替GP-SCH)，EAE組、TWPⅠ組(EAE+TWP10mg/kg·d)、TWPⅡ組(EAE+TWP 30 mg/kg·d)和PRD組(EAE+P

3、RD 5mg/kg·d)各15只。TWPⅠ組、TWPⅡ組、PRD組大鼠在抗原免疫后第1天開始，分別給予相應(yīng)藥物干預(yù)，每天一次，直到處死前一天。對照組在免疫后15天全部處死。其余四組在抗原免疫后根據(jù)處死時間不同又各自在組內(nèi)分為第11天、第15天、第21天處死三個亞組。觀察各組大鼠發(fā)病情況并進(jìn)行神經(jīng)功能評分。取大鼠腦和脊髓組織切片進(jìn)行檢測：采用蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色+羅克沙爾堅牢藍(lán)(luxol fast

4、 blue，LFB)髓鞘染色，在光鏡下進(jìn)行炎性病灶計數(shù)。免疫組化方法檢測各組大鼠腦組織內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子-KB p65 (nuclear factor KappaB，NF-kB p65)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的表達(dá)情況。采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 1.對照組大鼠發(fā)病率為0％。EAEN大鼠發(fā)病率為93.3％，約抗原免疫后11天開始發(fā)病，第15天臨床

5、癥狀達(dá)高峰。從發(fā)病開始，持續(xù)10～12天后病情緩解。免疫后第15天組織病理學(xué)改變也最明顯。光鏡下可見中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous，CNS)白質(zhì)內(nèi)小血管周圍袖套樣炎性細(xì)胞浸潤，部分可見神經(jīng)元變性、壞死以及脫髓鞘改變。干預(yù)組大鼠發(fā)病率較低(TWP Ⅰ組73.3％，TWPⅡ N53.5％，PRD組46.7％)，潛伏期相對延長1～2天。臨床癥狀明顯減輕。CNS內(nèi)炎性病灶明顯減少(干預(yù)組與EAE組比較有顯著差異，P<0.05；TW

6、PⅡ組、PRDN分別與TWPⅠ組比較有顯著差異，P<0.05；TWP Ⅱ組與PRD組比較無顯著差異，P>0.05)。 2.EAE組：與對照組比較，第11天EAE組大鼠腦組織內(nèi)NF-k3 p65、TNF-α表達(dá)水平明顯增高，差異有顯著性(P<0.05)。與第11天比較，第15天大鼠腦組織內(nèi)NF-kB p65、TNF-α表達(dá)水平明顯增高，差異有顯著性(P<0.05)。與第15天比較，第21天NF-kB p65、TNF-α表達(dá)水平明顯

7、降低，差異有顯著性(P<0.05)。 3.TWPⅠ組、TWPⅡ組、PRDN：與對照組比較，第11天各干預(yù)組大鼠腦組織內(nèi)NF-kB p65、TNF-α表達(dá)水平明顯增高，差異有顯著性(P<0.05)。與第11天比較，第15天大鼠腦組織內(nèi)NF-kB p65、TNF-α表達(dá)水平明顯增高，差異有顯著性(P<0.05)。與第15天比較，第21天NF-kB p65、TNF-α表達(dá)水平明顯降低，差異有顯著性(P<0.05)。與同期EAE組比較，

8、各干預(yù)組大鼠腦組織內(nèi)NF—kB p65、TNF-α表達(dá)水平明顯降低，差異有顯著性(P<0.05)。與同期TWP Ⅰ組比較， TWP Ⅱ組、PRD組大鼠腦組織內(nèi)NF-kB p65、TNF-α表達(dá)水平降低更明顯，均有顯著性差異(P<0.05)。TWP Ⅱ組與PRD組比較，差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論： 1．NF-kB p65、TNF-α可能參與EAE發(fā)病。 2．FWP能有效干預(yù)EAE大鼠發(fā)病，在一定程度上呈劑