側(cè)腦室注射P63抗體對(duì)大鼠腦缺血后P63和P53表達(dá)及神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察側(cè)腦室注射P63抗體對(duì)大鼠全腦缺血后海馬CA1區(qū)P63和P53表達(dá)及神經(jīng)元凋亡的影響,探討p63在腦缺血缺氧后P63和P53表達(dá)及神經(jīng)元凋亡中的作用,為腦缺血缺氧后神經(jīng)元凋亡的防治提供新的理論依據(jù)。
　　方法:雄性SD大鼠75只,按隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)等分為三組:假手術(shù)(A)組、缺血(B)組、抗體(C)組。神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分大于16分的大鼠納入本實(shí)驗(yàn)研究。假手術(shù)(A)組行側(cè)腦室注射人工腦脊液但不行全腦缺血處理;缺血(B)組行側(cè)腦室

2、注射人工腦脊液及全腦缺血處理;抗體(C)組行側(cè)腦室注射P63抗體及全腦缺血處理。三組實(shí)驗(yàn)大鼠分別于術(shù)后6h、12h、24h、48h、72h行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分后行2％戊巴比妥鈉麻醉,4%多聚甲醛灌注并取腦,腦組織切片分別行HE染色和TUNEL染色以測(cè)定海馬CA1區(qū)神經(jīng)元密度和神經(jīng)元凋亡指數(shù);免疫組化檢測(cè)海馬CA1區(qū)P63和P53的表達(dá),并對(duì)兩種蛋白的表達(dá)水平作半定量分析。
　　結(jié)果:1.動(dòng)物模型的構(gòu)建:本實(shí)驗(yàn)中有7

3、只大鼠死亡:5只死于術(shù)中呼吸心跳驟停,2只于術(shù)后未到取材時(shí)間點(diǎn)而死亡,均予以補(bǔ)充,共有75只大鼠納入統(tǒng)計(jì)分析。
　　2.神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:75只大鼠術(shù)前的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分均正常(16～20分)。A組大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分均在正常范圍。B組和C組大鼠在術(shù)后各時(shí)點(diǎn)的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著低于術(shù)前(p<0.01),術(shù)后各個(gè)時(shí)點(diǎn)評(píng)分以72h最低(p<0.05)。而C組大鼠術(shù)后6h評(píng)分與B組無(wú)差異,其后各個(gè)時(shí)點(diǎn)的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著高于B組(

4、p<0.01)。
　　3.神經(jīng)元密度:A組大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元密度無(wú)明顯差異(p>0.05)。B組和C組大鼠與A組比較,術(shù)后6h、12h、24h、48h、72h神經(jīng)元密度明顯降低(p<0.05),其中術(shù)后72h神經(jīng)元密度最低(p<0.05)。而C組大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)神經(jīng)元密度明顯高于B組(p<0.05)。
　　4.神經(jīng)元凋亡:A組大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)海馬CA1區(qū)僅見(jiàn)極少量凋亡細(xì)胞。而B組和C組大鼠與A組比較,術(shù)后6h、12

5、h、24h、48h、72h海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞指數(shù)顯著升高(p<0.01),其中術(shù)后48h凋亡指數(shù)最高(p<0.05)。而C組大鼠海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞指數(shù)明顯小于B組(p<0.05)。
　　5.P63和P53的表達(dá):A組大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)海馬CA1區(qū)僅見(jiàn)少量P63和P53表達(dá)。B組和C組大鼠與A組比較,術(shù)后各時(shí)點(diǎn)海馬CA1區(qū)P63和P53表達(dá)顯著增多(p<0.01)。P63在術(shù)后6h表達(dá)開始增加,于術(shù)后48h時(shí)達(dá)峰值,隨后表達(dá)降低。P

6、53在術(shù)后6h表達(dá)開始增多,24h時(shí)表達(dá)達(dá)高峰,隨后表達(dá)逐漸降低。B組和C組大鼠比較,術(shù)后各時(shí)點(diǎn)P53表達(dá)無(wú)明顯差異(p>0.05),但C組大鼠P63表達(dá)明顯低于B組(p<0.05)。
　　6.相關(guān)分析:大鼠腦缺血再灌注損傷后海馬CA1區(qū)P63與P53的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.592,p<0.01);P63的表達(dá)與腦缺血后神經(jīng)元凋亡呈正相關(guān)(r=0.853,p<0.01);P53的表達(dá)與腦缺血后神經(jīng)元凋亡呈正相關(guān)(r=0.852,p