乳腺導(dǎo)管增生性病變和浸潤性乳腺癌MTDH蛋白表達(dá)及SNP篩選的研究.pdf

1、目的：觀察乳腺普通型增生(usual ductal hyperplasia, UDH)、不典型增生(atypicalductal hyperplasia，ADH)、原位癌(ductal carcinoma in situ, DCIS)及浸潤癌(invasivebreast carcinoma，IBC)中MTDH的表達(dá)，探討MTDH在乳腺疾病發(fā)生進(jìn)展過程中的作用。并篩選MTDH基因新的功能性多態(tài)位點(diǎn)，探討其與乳腺癌的關(guān)系。方法：本實(shí)驗(yàn)采用

2、免疫組織化學(xué)SP三步法檢測80例乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變，162例浸潤性乳腺癌和7例正常乳腺組織標(biāo)本中MTDH的表達(dá)。提取65例乳腺癌和60例正常健康人血液基因組DNA，利用PCR擴(kuò)增和直接測序法，篩選出新的SNP位點(diǎn)。用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫組化染色結(jié)果顯示，在增生性病變中，MTDH蛋白高表達(dá)率分別為UDH24.14％(7/29)，ADH28.57％(4/14)，DCIS

3、72.97％(27/37)，在正常組織中，MTDH的表達(dá)率為0％(0/7)，而在浸潤性乳腺癌中其高表達(dá)率為55.56％(90/162)。統(tǒng)計(jì)分析，從正常乳腺組織到導(dǎo)管內(nèi)增生性病變再到浸潤性癌的發(fā)展過程中，MTDH蛋白的表達(dá)有逐漸升高趨勢，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異(P＜0.001)。
　　 2.在DCIS中，MTDH的高表達(dá)與細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki67高表達(dá)相關(guān)(P=0.008)，在低級別導(dǎo)管內(nèi)癌MTDH的高表達(dá)率為59.09％(13/2

4、2)，而在高級別導(dǎo)管內(nèi)癌MTDH的高表達(dá)率為93.33％(14/15)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)。
　　 3.在浸潤性乳腺癌中，MTDH的高表達(dá)分別與患者的年齡(P=0.042)、Ki67增殖指數(shù)(P=0.036)、ER表達(dá)狀態(tài)(尸=0.018)和P53表達(dá)狀態(tài)(P=0.001)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果顯示MDTH高表達(dá)的乳腺癌患者較年輕，Ki67增值指數(shù)高，ER陰性表達(dá)，P53高表達(dá)。

5、　　 4.PCR擴(kuò)增和直接測序法結(jié)果顯示（SNP位點(diǎn)篩選），在MTDH基因5’上游區(qū)和外顯子12的3'UTR區(qū)發(fā)現(xiàn)多處SNP位點(diǎn)，包括-470G＞A、-200G＞A、2928C＞T、3088A＞G、3540T＞C。MTDH外顯子12的3'UTR區(qū)的3個(gè)SNP位點(diǎn)(2928C＞T、3088A＞G、3540T＞C)之間均處于完美連鎖不平衡狀態(tài)，D’=1，r2=1。在我們的研究人群中只檢測到2個(gè)單倍型，C2928A3088T3540（野生型

6、）和T2928G3088C3540（突變型）。
　　 5.乳腺癌患者組與正常對照組之間，5個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.在正常乳腺組織，MTDH蛋白不表達(dá)或者低表達(dá)，但是從普通型增生、不典型增生到導(dǎo)管原位癌，MTDH的表達(dá)強(qiáng)度和水平逐漸增高。研究結(jié)果表明MTDH可能在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變的發(fā)生進(jìn)展中發(fā)揮一定作用。在導(dǎo)管內(nèi)癌中MTDH蛋白表達(dá)水平比

7、浸潤性乳腺癌高，表明MTDH可能在乳腺癌發(fā)生的起始階段中起重要作用。
　　 2.MTDH在高增殖活性的浸潤性乳腺癌和DCIS病例中高表達(dá)，MTDH過表達(dá)與細(xì)胞高增殖活性相關(guān)。
　　 3.在UDH、ADH和DCIS中，MTDH蛋白的表達(dá)強(qiáng)度和陽性率不同。在UDH和ADH，MTDH蛋白表達(dá)強(qiáng)度及表達(dá)率均低于高級別導(dǎo)管內(nèi)癌，說明MTDH可能在正常細(xì)胞到腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程中起一定作用。
　　 4.在浸潤性乳腺癌中，MTD