乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變及浸潤(rùn)性乳腺癌中ERβ蛋白表達(dá)及其基因甲基化的研究.pdf

1、[目的]:觀察乳腺普通型導(dǎo)管增生(usual ductal hyperplasia，uDH)、非典型導(dǎo)管增生(atypical ductal hyperplasia，ADH)、導(dǎo)管原位癌(ductal carcinoma in situ，DCIS)及浸潤(rùn)性乳腺癌(invasive breast cainoma，IBC)中雌激素受體β(estrogen receptor beta，ER β)基因啟動(dòng)子甲基化的變化及ERβ蛋白的表達(dá)，分析E

2、Rβ基因甲基化與ERβ蛋白表達(dá)之間，ERβ與ERα之間的相關(guān)性，旨在探討ERβ在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的作用，以期為臨床指導(dǎo)乳腺癌內(nèi)分泌治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]:選擇齊魯醫(yī)院2002～2005年外科手術(shù)切除標(biāo)本64例，其中乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變44例(UDH 12例，ADH 8例，DCIS 24例)，浸潤(rùn)性乳腺癌14例，正常乳腺組織6例(來(lái)自乳腺整形手術(shù))。所選標(biāo)本均經(jīng)10﹪福爾馬林固定，石蠟包埋。根據(jù)2003年WHO乳腺腫瘤病

3、理診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所選病例的HE組織切片進(jìn)行復(fù)習(xí)以確定診斷。從全部病例的石蠟包埋組織中提取DNA進(jìn)行甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR，MSP)檢測(cè)，對(duì)其中57例組織切片采用二步法進(jìn)行ERβ的免疫組織化學(xué)染色。用SPSS軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 [結(jié)果]:在12例UDH中，7例檢測(cè)到甲基化，甲基化率為58.3﹪；8例ADH中，5例檢測(cè)到甲基化，甲基化率為62.5﹪；24例DCIS中，15例檢測(cè)到甲

4、基化，甲基化率為62.5﹪；14例.IBC中，11例檢測(cè)到甲基化，甲基化率為78.6﹪，6例正常乳腺組織中均未檢測(cè)到ERβ甲基化。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正常乳腺組織和UDH、ADH、DCIS及IBC之間ERβ基因甲基化率有顯著性差異；其余各組之間ERβ基因甲基化率無(wú)顯著性差異。從正常乳腺組織到導(dǎo)管內(nèi)增生性病變?cè)俚浇?rùn)性癌的發(fā)展過(guò)程中ERβ基因甲基化率呈增高趨勢(shì)，經(jīng)線性趨勢(shì)檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 免疫組化染色結(jié)果顯示，ERβ蛋

5、白陽(yáng)性例數(shù)百分率：6例正常乳腺組織全部陽(yáng)性，陽(yáng)性率為100﹪(6/6)；UDH為81.8﹪(9/11)；ADH為42.9﹪(3/7)；DCIS為45.5﹪(10/22)；IBC為27.3﹪(3/11)。ERβ蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率：正常乳腺組織中為86.4﹪，UDH為64.3﹪，ADH為25.0﹪，：DCIS為27.2﹪，而在浸潤(rùn)性癌中為9.3﹪，從正常乳腺組織到導(dǎo)管內(nèi)增生性病變?cè)俚浇?rùn)性癌的發(fā)展過(guò)程中ERβ蛋白的陽(yáng)性例數(shù)百分率和陽(yáng)性細(xì)胞表

6、達(dá)率都呈下降趨勢(shì)，且這種變化趨勢(shì)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在31例ERB陽(yáng)性的病例中，14例檢測(cè)到甲基化，甲基化率為45.2﹪；在26例ERB陰性的病例中，20例檢測(cè)到甲基化，甲基化率為76.9﹪。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析ERB陽(yáng)性組和ERβ陰性組之間，ERβ基因甲基化率有顯著性差異(P<0.05)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果提示，ERβ蛋白表達(dá)與ER β基因甲基化兩者之間呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)合以往我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)配對(duì)統(tǒng)計(jì)分析提示，ER β蛋白表達(dá)與ER Q蛋白表達(dá)不

7、具有相關(guān)性，ER β甲基化與ERα甲基化之間也不具有相關(guān)性(P>0.05)。 [結(jié)論]:1．ERβ基因啟動(dòng)子在正常乳腺組織中未發(fā)生甲基化，而在乳腺癌變中出現(xiàn)甲基化，但尚有少部分乳腺癌的ERβ基因未發(fā)生甲基化。2．在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變中，：ER β基因甲基化已經(jīng)存在，表明ERβ基因甲基化可能是癌變發(fā)生的早期事件。3．從正常乳腺組織到普通型導(dǎo)管增生、非典型導(dǎo)管增生、導(dǎo)管內(nèi)原位癌直到浸潤(rùn)性乳腺癌的發(fā)展過(guò)程中，ERβ基因的甲基化率呈逐

8、漸上升趨勢(shì)，而ER B蛋白表達(dá)呈下降趨勢(shì)，這提示隨著癌變的發(fā)展過(guò)程，ER β基因的甲基化逐漸增加，ERβ蛋白表達(dá)逐漸喪失。4．從正常乳腺組織到增生性病變?cè)俚浇?rùn)性乳腺癌的發(fā)展過(guò)程中ERβ蛋白的失表達(dá)與ERβ基因甲基化有一定的關(guān)系，啟動(dòng)子的甲基化很可能是ERβ基因沉默的方式之一。5．ERβ的基因甲基化及蛋白表達(dá)與ERα基因甲基化及蛋白表達(dá)之間無(wú)明顯關(guān)系，表明ERβ的作用不依賴于ERα的存在，提示ERβ蛋白在乳腺癌內(nèi)分泌治療中的作用可能與E