依托咪酯乳劑后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:評價腹腔注射20 mg/kg依托咪酯乳劑后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 方法:104只清潔級健康雄性SD大鼠,重量250～300 g,隨機(jī)分為四組(每組n=26):假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(I/R組)、脂肪乳組(L組)和依托咪酯后處理組(Eto組)。采用栓塞右側(cè)大腦中動脈(MCAO)制備腦缺血再灌注模型。I/R組、L組和Eto組于再灌注即刻分別腹腔注射生理鹽水、脂肪乳(依托咪酯溶劑)和依托咪

2、酯乳劑20 mg/kg(所有大鼠給藥容積固定為1 ml/100g)。每組隨機(jī)取8只于12 h、24 h、72 h行神經(jīng)功能缺損評分(NSS),并于再灌注72 h時取大鼠腦組織,行2,3,5-氯化三苯基四唑氮(TTC)染色計(jì)算腦梗死面積(IS)。各組剩余18只大鼠再按再灌注后不同時點(diǎn)(12 h、24h和72 h)分3個亞組(n=6)。在上述3個時點(diǎn)取大鼠腦標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋切片后,①行HE染色觀察神經(jīng)組織病理變化;②用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移

3、酶介導(dǎo)的末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測細(xì)胞凋亡,計(jì)算凋亡指數(shù)(AI);③免疫組化(immunohistochemistry)染色法測定Bcl-2和Bax的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:四組大鼠各時點(diǎn)的NSS評分的變化:Sham組各時點(diǎn)評分均為0;其余三組各時點(diǎn)和同時點(diǎn)Sham組比較,NSS評分顯著增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05):I/R組和L組各時點(diǎn)NSS評分組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與I/R組和L組相比,Eto組各

4、時點(diǎn)NSS評分降低(P＜0.05)。
　　 四組大鼠腦梗死面積的比較:Sham組腦梗死面積為0;其余三組各時點(diǎn)和同時點(diǎn)Sham組比較,腦梗死面積顯著增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);I/R組(40.1±2.3)％和L組(39.3±2.1)％腦梗死面積組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與I/R.組和L組相比,Eto組(26.0±4.9)％腦梗死面積顯著減少(P＜0.05)。
　　 四組大鼠神經(jīng)病理變化:Sham

5、組各時間點(diǎn)未見病理改變;其余三組均可見不同程度的病理改變;I/R組缺血側(cè)腦組織可見神經(jīng)細(xì)胞胞核固縮、碎裂溶解,細(xì)胞數(shù)量減少;L組病理變化與I/R相似;與I/R組和L組相比,Eto組缺血側(cè)腦組織的病理變化較輕,神經(jīng)組織較致密,神經(jīng)元數(shù)量較多。
　　 四組大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況:Sham組各時點(diǎn)可見少量散在分布的凋亡細(xì)胞:其余三組各時點(diǎn)和同時點(diǎn)Sham組比較,凋亡細(xì)胞顯著增多,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);I/R組于再灌注24

6、h凋亡細(xì)胞數(shù)顯著高于再灌注12 h(P＜0.05),隨著時間推移,再灌注72 h凋亡細(xì)胞數(shù)較24 h時顯著減少(P＜0.05);L組各時點(diǎn)與同時點(diǎn)I/R組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與I/R組和L組相比,Eto組各時點(diǎn)凋亡細(xì)胞顯著減少(P＜0.05)。
　　 四組大鼠Bcl-2和Bax表達(dá)情況:Sham組各時點(diǎn)均可見少量散在分布的Bcl-2和Bax陽性細(xì)胞:其余三組各時點(diǎn)和同時點(diǎn)Sham組比較,Bcl-2和Bax陽性

7、細(xì)胞顯著增多,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);I/R組Bcl-2于再灌注12 h時陽性細(xì)胞數(shù)最多,顯著高于24 h和72 h(P＜0.05);Bax陽性細(xì)胞數(shù)在再灌注24 h時最多,與再灌注12 h比較顯著增高(P＜0.05),之后又呈減少趨勢,至灌注72 h時Bax顯著低于再灌注24 h(P＜0.05);L組各時點(diǎn)與同時點(diǎn)I/R組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與I/R組和L組相比,Eto組各時點(diǎn)Bcl-2陽性細(xì)胞顯著增多