肉蓯蓉有效成份分析及指紋圖譜研究.pdf

1、本課題的研究方向是，中藥有效成份的分析和指紋圖譜研究。以中藥肉蓯蓉為研究對(duì)象，建立了測(cè)定肉蓯蓉中幾種有效成份含量的方法。同時(shí)，采用高效液相色譜法對(duì)肉蓯蓉的指紋圖譜進(jìn)行了初步的研究。課題的研究?jī)?nèi)容主要包括以下四個(gè)部分：1.毛細(xì)管電泳法測(cè)定肉蓯蓉中的甘露醇及其糖類物質(zhì)；2.毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)法研究肉蓯蓉多糖的單糖組成；3.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定肉蓯蓉中的甜菜堿：4.肉蓯蓉的高效液相色譜指紋圖譜研究。 第一部分，采用毛細(xì)

2、管電泳電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定了肉蓯蓉中的甘露醇及其幾種糖類物質(zhì)的含量。同時(shí)，研究了電極電位、運(yùn)行緩沖液濃度、分離電壓及進(jìn)樣時(shí)間等電泳條件對(duì)測(cè)定的影響。得到了最佳電泳條件：電極電位0.65 V(vs.SCE)、分離電壓21 kV、電動(dòng)進(jìn)樣6 s、運(yùn)行緩沖液0.10 mol/LNaOH溶液。在此優(yōu)化條件下，甘露醇、蔗糖、葡萄糖、果糖得到很好的分離。在1×10<'-5>mol/L～1×10<'-3>mol/L的范圍內(nèi)存在良好的線性關(guān)系，方法檢測(cè)限低

3、，回收率測(cè)定結(jié)果說明該法準(zhǔn)確、可靠。對(duì)內(nèi)蒙、甘肅、新疆三地產(chǎn)肉蓯蓉的測(cè)定表明，不同產(chǎn)地的肉蓯蓉藥材中甘露醇、蔗糖、葡萄糖、果糖的相對(duì)含量不同，甘肅產(chǎn)肉蓯蓉的甘露醇含量較高，新疆野生肉蓯蓉的果糖含量豐富。此結(jié)果為肉蓯蓉的合理利用及開發(fā)提供了有利的參考依據(jù)。 第二部分，利用毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)法研究了肉蓯蓉多糖的單糖組成，比較不同種肉蓯蓉粗多糖的單糖組成差異。采用超聲提取、沸水抽提、Sevag法脫蛋白、乙醇沉淀等一系列步驟制備水溶性

4、肉蓯蓉粗多糖，將所得粗多糖在稀酸溶液中水浴100℃條件下水解。利用毛細(xì)管電泳．電化學(xué)檢測(cè)研究水解液中單糖的種類及其相對(duì)組成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肉蓯蓉粗多糖由葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、果糖等組成。不同種及天然與人工栽培的肉蓯蓉粗多糖的單糖組成有明顯差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為肉蓯蓉多糖結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步研究奠定了理論基礎(chǔ)。 第三部分，建立了高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定肉蓯蓉中甜菜堿含量的方法。研究了色譜柱、流動(dòng)相組成、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)

5、等因素對(duì)甜菜堿測(cè)定的影響，得到了最優(yōu)化的測(cè)定條件：色譜柱：Waters Spherisorb S5 NH<,2>(250 mm×4.6 mm i.d，5μm)；流動(dòng)相：0.1％三氟乙酸：甲醇=15：85(體積分?jǐn)?shù))；檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度，90℃；噴霧器溫度，45℃；載氣壓力，16 psi。結(jié)果表明，方法具有精密度高、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)。采用該法對(duì)不同種肉蓯蓉中甜菜堿含量的測(cè)定結(jié)果表明：管花肉蓯蓉不含甜菜堿，因此，該法對(duì)于鑒別正品肉蓯蓉和

6、管花肉蓯蓉具有一定的參考價(jià)值。 第四部分，采用高效液相色譜法建立了不同產(chǎn)地肉蓯蓉藥材的指紋圖譜。研究了流動(dòng)相、梯度洗脫條件及檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇對(duì)肉蓯蓉指紋圖譜的影響，得到了優(yōu)化的測(cè)定條件。色譜條件：色譜柱，NUCLEODUR 100-5 C<,18>(250 mm ×4.6 mm i.d，5 μm)；流動(dòng)相，甲醇：0.1％三氟乙酸梯度洗脫：流速，0.6 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)，243 nm。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度，90℃；