周細(xì)胞在腹透時(shí)腹膜血管新生中的作用研究.pdf

1、長(zhǎng)期腹膜透析（腹透）后腹膜發(fā)生血管新生，導(dǎo)致腹膜功能進(jìn)行性下降并最終引發(fā)超濾衰竭，是患者退出腹透的主要原因之一。然而，長(zhǎng)期腹透后腹膜血管新生的機(jī)制目前尚不清楚。血管周細(xì)胞及其表達(dá)的血管生成素-1（Angiopoietin-1，Angpt-1）、表皮生長(zhǎng)因子受體（epithelial growth factor receptor，EGFR）對(duì)血管新生起重要調(diào)控作用。本研究旨在通過(guò)觀察高濃度葡萄糖、葡萄糖降解產(chǎn)物（glucose degra

2、dation products，GDP）、炎癥因子和尿毒癥血清對(duì)體外培養(yǎng)的血管周細(xì)胞生長(zhǎng)增殖以及表達(dá)Angpt-1、EGFR的影響，來(lái)探討周細(xì)胞在腹膜血管新生中的作用，從而為防治腹膜血管新生、長(zhǎng)期保存腹膜功能尋找新的思路。 體外培養(yǎng)的人血管周細(xì)胞在同步化后，分別采用不含血清的DMEM培養(yǎng)液（對(duì)照組）、1.5％、2.5％和4.25％濃度的葡萄糖（G）以及相同濃度的甘露醇（M）、400μM和800μM 甲基乙二醛（methylgly

3、oxal，MGO）、10ng/ml和100ng/ml TNF-α、20％正常人血清（20％NS）和20％尿毒癥血清（20％US）刺激細(xì)胞12h、24h、48h、和72h后，采用MTT方法檢測(cè)周細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖；用上述因素刺激周細(xì)胞6h和12h后，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化；Real-time PCR方法檢測(cè)Angpt-1、EGFR mRNA的表達(dá)；ELISA檢測(cè)Angpt-1蛋白的表達(dá)；Western blotting檢測(cè)EGFR蛋白

4、的表達(dá)。 MTT結(jié)果顯示，刺激12h，24h，48h和72h后，與對(duì)照組相比，4.25％G、4.25％M和800μM MGO明顯抑制了周細(xì)胞的增殖（p<0.05），且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，該抑制作用呈增加的趨勢(shì)；2.5％G對(duì)細(xì)胞增殖有抑制的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；4.25％G在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)周細(xì)胞的抑制作用均顯著強(qiáng)于4.25％M（p<0.05）。與20％NS相比，20％US顯著抑制了細(xì)胞增殖（p<0.05）。流式細(xì)胞檢測(cè)

5、結(jié)果顯示，刺激6h和12h后，與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞G1期DNA含量均呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)；與20％NS組相比，20％US組細(xì)胞周期呈現(xiàn)顯著的G1期阻滯；與6h相比，12h時(shí)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期均有不同程度的G1期阻滯。 刺激6h和12h后，與對(duì)照組相比，2.5％G、2.5％M、4.25％G、4.25％M以及兩組MGO周細(xì)胞Angpt-1基因和蛋白的表達(dá)均顯著減少（p<0.05），其余各組細(xì)胞Angpt-1表達(dá)無(wú)明顯變化（p>0.05

6、）；但與6h相比，12h時(shí)各組細(xì)胞Angpt-1表達(dá)呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)；與20％NS組相比，20％US組周細(xì)胞Angpt-1基因和蛋白的表達(dá)均明顯增加（p<0.05），且12h與6h相比，細(xì)胞Angpt-1的表達(dá)亦顯著增加（p<0.05）。 刺激6h和12h后，4.25％G、4.25％M以及兩組MGO刺激的周細(xì)胞 EGFR基因和蛋白的表達(dá)均較對(duì)照組明顯增加（p<0.05），其余各組細(xì)胞EGFR表達(dá)無(wú)顯著變化（p>0.05）；與20％

7、NS組相比，20％US組EGFR基因和蛋白的表達(dá)均顯著增加（p<0.05）；但與6h相比，12h時(shí)各組細(xì)胞EGFR表達(dá)均有不同程度的減少，僅在4.25％G、800μM MGO和20％US組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。 綜上所述，高濃度葡萄糖、高滲和MGO以時(shí)間和濃度依賴(lài)的方式抑制體外培養(yǎng)的周細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，下調(diào)周細(xì)胞Angpt-1基因和蛋白、上調(diào)EGFR基因和蛋白的表達(dá)；尿毒癥血清顯著抑制周細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，上調(diào)Angpt-