版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、背景和目的
終末期腎臟病(end stage renal disease,ESRD)已成為21世紀全人類面臨的主要公共健康問題之一。腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是終末期腎臟病有效的治療方法,具有保護殘余腎功能、花費相對血液透析低等優(yōu)勢。但由于腹膜透析的并發(fā)癥,如腹膜炎、營養(yǎng)不良、腹膜超濾衰竭,尤其透齡4-5年的患者,腹膜超濾衰竭發(fā)生率高達36%,已經(jīng)成為腹膜透析患者被迫退出腹透的主要因為之一,因
2、此探討并干預(yù)腹膜透析超濾衰竭的發(fā)生與發(fā)展非常重要。
目前認為超濾衰竭的發(fā)病機制主要有三方面的因素:1、腹膜血管表面積的不斷增加:約50%到75%的超濾衰竭是由于腹膜血管新生導(dǎo)致腹膜血管表面積的不斷增加,使得小分子溶質(zhì)轉(zhuǎn)運加快致腹腔滲透壓遞度迅速消失,使腹膜超濾功能喪失;2、因為水通道蛋白失功能;3、腹膜間質(zhì)/淋巴系統(tǒng)吸收增加。
腹膜血管新生可能是超濾衰竭發(fā)生的主要機制,調(diào)節(jié)血管新生的誘導(dǎo)劑有血管內(nèi)皮生長因子(
3、vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor,)等其它可溶性因子;抑制劑包括血管新生抑制素、內(nèi)皮細胞抑制素(endostain,ES)等。目前認為血管生成時受到誘導(dǎo)因子和抑制因子的雙重調(diào)節(jié),正常情況下處于平衡狀態(tài),一旦誘導(dǎo)劑占優(yōu)勢,則激活血管長出新生血管,反之則使血管硬化。長期行腹膜透析的病人在其腹膜透析液中發(fā)現(xiàn)一些血管誘導(dǎo)劑增加,
4、如VEGF、bFGF等,而且目前公認為血管內(nèi)皮生長因子在腹透失超濾的發(fā)病機制中,是促進血管新生的主要因子,在血管新生中居于主導(dǎo)地位,并發(fā)現(xiàn)它在腹膜毛細血管內(nèi)皮細胞和腹膜間皮細胞(peritonealmesothelial cells,PMc)有陽性表達,但這些導(dǎo)致血管新生的因子表達增加的具體機制目前仍不清楚。綜上所述我們有必要探討腹膜血管新生在腹透失超濾發(fā)生機制所起的作用并進行干預(yù)研究,以便為延緩腹透失超濾的發(fā)生提供理論根據(jù)和實驗依據(jù),
5、從而為多環(huán)節(jié)防治腹膜透析超濾衰竭的發(fā)生發(fā)展提供有效的治療手段。
因此本研究共分三部分:
第一部分腹膜血管新生引起腹膜超濾衰竭的動物實驗研究
構(gòu)建5/6腎切除尿毒癥大鼠模型,進而構(gòu)建尿毒癥腹膜透析大鼠模型。檢測大鼠腹膜組織VEGF、bFGF及ES基因和蛋白質(zhì)水平的表達變化,以及檢測腹膜組織毛細血管密度(MVD),探討腹膜新生血管引起大鼠腹膜透析超濾衰竭的機制,為了下一步干預(yù)實驗打好理論基礎(chǔ)。
6、> 第二部分腹膜血管新生引起腹膜超濾衰竭的臨床研究
留取正常對照者(取自非尿毒癥的腹部擇期手術(shù)患者,排除任何可累及腹膜的疾病)、尿毒癥非透析患者(尿毒癥患者首次腹透置管時)以及腹透超濾衰竭患者(尿毒癥患者拔出腹透管時)的腹膜活檢標本。檢測血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維生長因子和內(nèi)皮抑素基因和蛋白質(zhì)水平的表達,檢測腹膜組織毛細血管密度。為下一步干預(yù)腹膜透析超濾衰竭的研究奠定理論基礎(chǔ)。
第三部分重組人內(nèi)皮抑素
7、(恩度)干預(yù)腹膜血管新生的動物實驗研究
應(yīng)用重組人內(nèi)皮抑素(恩度),干預(yù)大鼠腹膜透析腹膜血管新生,從而起到抑制腹膜血管新生,干預(yù)腹膜透析超濾衰竭的作用,為下一步治療臨床腹膜透析患者超濾衰竭提供實驗根據(jù)。
一.資料與方法
SD雄性大鼠42只,體重180-200g。構(gòu)建5/6腎切除尿毒癥大鼠模型,進而構(gòu)建尿毒癥腹膜透析大鼠模型。實驗設(shè)立正常組(n=8只),手術(shù)組三組:尿毒癥組(n=8只)、1.5%腹
8、膜透析組(n=8只)、4.25%腹膜透析組(n=8只)。對各透析組大鼠進行規(guī)律腹透,每日每只20ml腹透液從大鼠頸部腹透管注入,腹腔保留2h后放出液體,規(guī)律透析28天后,取各組大鼠新鮮腹膜組織分別做逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及組織免疫組化,檢測VEGF、bFGF及ES基因和蛋白質(zhì)水平的表達變化,以CD34染色檢測腹膜組織毛細血管密度(MVD),并進行統(tǒng)計學(xué)比較和基因水平的相關(guān)性分析,選取α=0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的檢驗水
9、準。
二.結(jié)果
1.VEGF、bFGF及ES在正常大鼠腹膜組織中呈陽性表達。
2.與正常組相比較,尿毒癥組、1.5%腹膜透析組、4.25%腹膜透析組,VEGF、bFGF在基因及蛋白的表達水平均升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
3.正常組、尿毒癥組、1.5%腹膜透析組及4.25%腹膜透析組大鼠腹膜組織中均有ES mRNA表達。其中正常組為0.47±0.05;尿毒癥組為0.4
10、5±0.04;1.5%腹膜透析組為0.46±0.04;4.25%腹膜透析組為0.47±0.03;各組間表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
4.正常組大鼠腹膜組織中ES蛋白表達積分0分;尿毒癥組大鼠腹膜組織中積分2分;1.5%腹膜透析組大鼠腹膜組織中積分4分;4.25%腹膜透析組大鼠腹膜組織中呈高表達,積分9分。
5.與正常組相比較,尿毒癥組、1.5%腹膜透析組、4.25%腹膜透析組大鼠腹膜組織中MVD的表
11、達均增高,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
第二部分腹膜血管新生引起腹膜超濾衰竭的臨床研究
一.資料與方法
留取正常對照者、尿毒癥非透析患者以及腹透超濾衰竭患者的腹膜活檢標本。將所留取的腹膜標本分別行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和組織免疫組化染色,檢測血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維生長因子和內(nèi)皮抑素基因和蛋白質(zhì)水平的表達。行CD34染色,計數(shù)腹膜組織毛細血管密度。
二.
12、結(jié)果
1.VEGF、bFGF及ES的mRNA在各組人腹膜組織均有表達。與正常相比較,尿毒癥非透析組、PD組腹膜組織VEGF、bFGF mRNA表達上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與尿毒癥非透析組相比較,PD組腹膜組織 VEGF、bFGF mRNA表達上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ES mRNA各組表達無差異。
2.各組腹膜組織均表達VEGF、bFGF及ES。與正常相比較,尿毒癥非透析組、
13、PD組腹膜組織VEGF、bFGF、ES蛋白表達上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與尿毒癥非透析組相比較,PD組腹膜組織VEGF、bFGF、ES蛋白表達上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3.MVD計數(shù)結(jié)果在正常組可見新生毛細血管較少或無,與正常組相比較,尿毒癥非透析組、腹膜透析超濾衰竭組人腹膜組織MVD計數(shù)增加(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
第三部分重組人內(nèi)皮抑素(恩度)干預(yù)腹膜血管新
14、生的動物實驗研究
一.資料與方法
清潔級雄性SD大鼠43只,體質(zhì)量為180-200g。構(gòu)建5/6腎切除尿毒癥大鼠模型,進一步構(gòu)建尿毒癥腹膜透析大鼠模型。實驗分為A:對照組(正常組:n=8只),B:尿毒癥非透析組(5/6腎切除組:n=8只)、C:尿毒癥腹膜透析組(生理鹽水對照組:n=8只)、D1:重組人內(nèi)皮抑素治療1組(10mg/kg治療組:n=8只),D2:重組人內(nèi)皮抑素治療2組(40mg/kg治療組:n=8
15、只)。對C、D1、D2組大鼠進行規(guī)律腹透,每日4.25%的腹透液從大鼠頸部腹透管注入,腹腔保留2h后放出液體,規(guī)律透析28天。D1、D2組(重組人內(nèi)皮抑素治療1、2組)在規(guī)律腹透期間,隔天皮下注射重組人內(nèi)皮抑素,連續(xù)給藥14次,直至腹透第28天結(jié)束,留取各組大鼠新鮮腹膜組織,采用免疫組織化學(xué)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測腹膜組織VEGF基因及蛋白水平的表達,用CD34染色觀察各組大鼠腹膜血管數(shù)并計算腹膜組織毛細血管密度(
16、Microvessel Density,MVD),所得結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析,選取α=0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的檢驗水準。
二.結(jié)果
1.與正常組相比較,尿毒癥組、尿毒癥腹膜透析組,VEGF基因及蛋白水平的表達均升高(p<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與尿毒癥腹膜透析組相比較,重組人內(nèi)皮抑素治療1組、重組人內(nèi)皮抑素治療2組,VEGF基因及蛋白水平的表達均降低(p<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與重組人內(nèi)
17、皮抑素治療1組相比較,重組人內(nèi)皮抑素治療2組,VEGF-A基因及蛋白水平的表達均降低(0<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.與正常組相比較,尿毒癥組、尿毒癥腹膜透析組,MVD的值均增加(p<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與尿毒癥腹膜透析組相比較,重組人內(nèi)皮抑素治療1組、重組人內(nèi)皮抑素治療2組,MVD的值均降低(p<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與重組人內(nèi)皮抑素治療1組相比較,重組人內(nèi)皮抑素治療2組,MVD的值降低(
18、p<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
3.VEGF基因水平的表達與MVD值呈現(xiàn)正相關(guān),VEGF和尿毒癥長期腹透時腹膜血管新生相關(guān)。
結(jié)論
1.大鼠和人的腹膜組織均表達VEGF、bFGF及ES,體內(nèi)尿毒癥環(huán)境和非生理性腹透液的刺激可以上調(diào)腹膜組織VEGF、bFGF基因和蛋白的表達。
2.尿毒癥腹膜透析大鼠和人腹膜組織VEGF、bFGF基因及蛋白水平表達升高,可能在長期透析所致腹膜組織
19、新生毛細血管形成過程中發(fā)揮一定的促血管新生作用,是腹透失超濾發(fā)生的重要因素之一。
3.體內(nèi)尿毒癥毒素和非生理性腹透液刺激可使大鼠和人的腹膜組織ES蛋白表達升高,在長期透析所致腹膜組織毛細血管生成增多中可能發(fā)揮一定的抑制血管生成作用。
4.重組人內(nèi)皮抑素(恩度)能抑制尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜新生血管的形成,并且其抑制作用的強弱與藥物的劑量有關(guān)。
5.重組人內(nèi)皮抑素(恩度)可能是通過下調(diào)尿毒癥腹膜透析
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 腹膜透析超濾治療
- 腹膜透析超濾治療介紹
- 腹膜透析超濾治療后
- 血管內(nèi)皮生長因子與腹膜透析失超濾發(fā)病機制關(guān)系的研究.pdf
- 血管生成素及其受體在腹膜透析腹膜組織中的表達.pdf
- Tristetraprolin和VEGF家族的表達異常參與腹膜透析大鼠超濾衰竭的發(fā)生.pdf
- 不同濃度腹膜透析液對CAPD大鼠腹膜VEGF的表達及新生血管形成的影響.pdf
- 塞來昔布對尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜功能和血管新生的影響.pdf
- 新生兒腹膜透析
- 腹膜后大血管超聲
- HO-1在腹膜透析所致腹膜纖維化中的作用及其機制.pdf
- 急性腎衰竭與腹膜透析
- 血管生成素在腹透時腹膜血管新生中的作用研究.pdf
- 腹膜透析——標準腹膜透析平衡實驗pet操作流程
- 周細胞在腹透時腹膜血管新生中的作用研究.pdf
- 腹膜與腹膜腔
- 高糖腹膜透析液對大鼠腹膜的影響及血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑的干預(yù)作用.pdf
- 腹膜重建尿道的實驗研究.pdf
- 脂肪細胞在腹膜血管新生和內(nèi)皮功能紊亂中的作用研究.pdf
- 腹股溝區(qū)、腹膜腹膜腔
評論
0/150
提交評論