抗戊型肝炎病毒單克隆抗體識別表位的初步研究及戊型肝炎病毒基因1型和基因4型中和表位區(qū)域分子差異研究.pdf

1、戊型肝炎病毒(HEV)是戊型肝炎的病原體，隨著HEV流行病學研究的深入，發(fā)現(xiàn)HEV的4個主要基因型存在著明顯的易感宿主差異：基因1型(HEV-1)和基因2型(HEV-2)僅分離于人類，能導致大規(guī)模的戊肝爆發(fā)流行，實驗動物目前只成功感染非人靈長類，而基因3型(HEV-3)和基因4型(HEV-4)人畜共患，僅見于小規(guī)模流行和臨床散發(fā)。將HEV分為兩類：包括HEV-1/2的H (Human)類和包括HEV-3/4的Z(Zoonosis)類。

2、 首先通過Western blot、體外捕獲PCR、ELISA阻斷實驗及合成的多肽庫對實驗室制備的多株抗HEV單抗的識別表位進行系統(tǒng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)12株線性單抗識別的位都位于ORF2 aa408-458之間，17株構(gòu)象型單抗識別表位都定位于ORF2 aa459-606之間，其中15株的識別表位位于天然病毒表面。 現(xiàn)有研究結(jié)果表明HEV的主要中和表位區(qū)域集中于ORF2的aa459-606之間，并且也是主要介導HEV與嗜性細

3、胞吸附的區(qū)域。本研究通過比較這兩類HEVORF2 aa368-606區(qū)段，發(fā)現(xiàn)存在4個類保守的差異位點，均位于HEV的主要中和表位區(qū)域，分別是Ser483Thr、Val492Met、Ser497Thr和Ala599Gly。以能形成類病毒顆粒的HEV 239(ORF2 aa368-606)為基礎(chǔ)，對這四個位點進行定點替換突變，并以這15株能夠捕獲HEV-1和/或HEV-4的單克隆抗體比較各種突變體的免疫反應性，結(jié)果表明僅aa497的差異造