膽汁淤積性肝纖維化時的病理改變及FoxL1在肝組織中的表達和意義初探.pdf

1、肝纖維化是肝臟對各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應，表現(xiàn)為肝內(nèi)膠原纖維異常增生，肝細胞變性壞死，肝組織結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞。臨床研究和動物實驗都已證明，肝纖維化是慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑。因此探討肝纖維化時的病理改變對深入研究肝纖維化的形成機制具有重要意義。 用于肝纖維化研究的動物模型有：中毒性肝損傷模型、膽汁性肝損傷模型、免疫性肝損傷性肝纖維化模型等，而本研究則選用小鼠膽總管結(jié)扎致肝纖維化的動物模型。該模型因具有操作簡單、穩(wěn)

2、定可靠等特點，成為研究中非常常用的實驗模型。在小鼠體內(nèi)行膽總管結(jié)扎術(shù)后，可引起膽汁肝內(nèi)淤積。當肝細胞受到刺激后，趨化因子和細胞因子釋放、中性粒細胞等募集到肝臟，進而出現(xiàn)肝細胞凋亡、壞死、肝性炎癥，細胞增殖等一系列相關(guān)反應。 在本課題中，我們通過膽總管結(jié)扎手術(shù)成功建立并評價了小鼠膽汁淤積性肝纖維化模型，并以此為體內(nèi)模型研究肝纖維化形成過程中的病理改變，本實驗選用與炎癥相關(guān)的KC-1、MIP-2、ICAM-1和MPO作為評價肝性炎癥

3、浸潤的指標，用與增殖相關(guān)的抗原PCNA、Ki-67和CK-19作為評價細胞增殖的指標，用TUNEL染色和病理切片作為評價凋亡和壞死的指標，研究膽汁淤積性肝纖維化形成中肝性炎癥、細胞增殖、凋亡和壞死情況。實驗研究結(jié)果顯示：膽總管結(jié)扎后，隨著趨化因子和細胞因子的升高，炎癥細胞浸潤，導致肝損傷。與假手術(shù)組相比，模型組肝性炎癥、細胞增殖、凋亡和壞死均顯著增加。提示肝纖維化的形成是多因素、多環(huán)節(jié)相互作用和調(diào)控的結(jié)果，但其確切機制尚未完全闡明。

4、 Fox(forkhead/winged helix transcription factor)基因家族是2000年才統(tǒng)一命名的功能多樣的“翼螺旋”轉(zhuǎn)錄因子，該家族成員具有一個高度保守的Forkhead結(jié)構(gòu)域，具有DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄活化和轉(zhuǎn)錄抑制等功能。已有研究結(jié)果表明肝星形細胞(hepatic stellate cell，HSC)激活是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而TGF-β1/Smads信號通路是調(diào)控HSC活化的主要通路。FoxC1調(diào)

5、控的部分靶基因有Smad2、BMP-7、TGF-β1等，提示FoxC1參與了TGF-β1信號通路。FoxL1是表達于胃腸道間葉細胞的轉(zhuǎn)錄因子，其Forkhead區(qū)域與FoxC1在核苷酸水平的同源性高達83％，由此提示：FoxL1可能通過參與TGF-β1/Smads信號通路，在調(diào)控肝纖維化形成過程中發(fā)揮重要作用。 在課題中我們采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)、實時熒光定量PCR技術(shù)、免疫組織化學染色技術(shù)以及Western blotting技術(shù)