半乳糖凝集素-3在大鼠肝纖維化組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、[目的]：
　　肝硬化是一種嚴(yán)重危害我國(guó)人民康健的常見疾病和多發(fā)疾病，每一年因肝硬化而致使死亡的人數(shù)約10～20萬(wàn)人，在各種病因中，超過(guò)80％的患者是由于感染了慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)所導(dǎo)致的。肝纖維化(hepaticfibrosis，HF)是由于肝臟遭到種種致病因子不斷作用下導(dǎo)致發(fā)生的肝細(xì)胞反復(fù)炎癥、變性、壞死、修復(fù)的一種病理過(guò)程，其重要特性是以多種膠原（包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型、Ⅳ膠原及透明質(zhì)酸等

2、）為主的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)過(guò)多地沉積在肝臟組織內(nèi)。肝纖維化是一個(gè)動(dòng)態(tài)進(jìn)展的過(guò)程，若不阻斷其進(jìn)程，可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化，是肝硬化的基礎(chǔ)和前期病變，在肝硬化的發(fā)病過(guò)程占據(jù)重要作用和地位。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）的活化與增值是肝纖維化發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，肝星狀細(xì)胞激活后變?yōu)槌衫w維細(xì)胞是其發(fā)病的關(guān)鍵，但肝星狀細(xì)胞激活機(jī)制尚未明確。肝纖維化時(shí)HSCs無(wú)論是其外部形

3、態(tài)，還是其內(nèi)部功能都發(fā)生了巨大的變化，此時(shí)大量活化、增殖的HSCs充滿了整個(gè)肝血竇內(nèi)皮，合成包括Ⅰ型、Ⅲ型膠原在內(nèi)的多種膠原為主的ECM;與此同時(shí)，也大量合成和分泌基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP)，來(lái)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)的活化，從而抑制ECM的降解。
　　許多因素參與到HSCs激活過(guò)程的調(diào)節(jié)和調(diào)控

4、，細(xì)胞因子在其中起重要作用。目前已知，TGF-β，MEK1/2-erk1/2信號(hào)通路是兩個(gè)最重要的信號(hào)通路。研究顯示，拮抗此兩條信號(hào)通路不但可以拮抗肝纖維化的發(fā)展，減緩肝硬化的進(jìn)程，而且還能減輕肝臟炎癥，益于肝臟恢復(fù)，對(duì)肝纖維化的預(yù)防和治療具有重要的意義。半乳糖凝集素3（galectin-3，Gal-3）是一種動(dòng)物凝集素的凝集素Lectin家族成員，廣泛參與細(xì)胞黏附，遷移，增殖，分化和凋亡。最近研究發(fā)現(xiàn)重組Gal-3能通過(guò)MEK1/2-

5、erk1/2信號(hào)轉(zhuǎn)到通路來(lái)刺激培養(yǎng)的HSC活化和增殖，提示其在肝臟病變過(guò)程中發(fā)揮重要作用，與肝纖維化有關(guān)。
　　本研究將通過(guò)肝纖維化大鼠模型，觀察Gal-3、TGF-β1、a-SMA在肝纖維化大鼠模型中的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況，初步明確其抗肝纖維化的作用機(jī)制。
　　[方法]：
　　建立大鼠二甲基亞硝胺（dimethylnitros-amine，DMN）腹腔注射的肝纖維化模型。將制得24只肝纖維化大鼠編為肝纖維化模型組，另外取雄性

6、、健康SD大鼠（清潔級(jí)）6只作為健康對(duì)照組。在造模完成后的2、4、6、8周各處死6只，分別留取門靜脈血清和肝組織標(biāo)本，置于-70℃冰箱保存待檢。采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清ALT、AST、Alb水平，采用蘇木精-伊紅及Masson染色觀察肝組織病理學(xué)改變，采用RT-PCR檢測(cè)上述各個(gè)時(shí)間點(diǎn)肝組織中的Gal-3、TGF-β1和a-SMA mRNA的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用((x±s)表示，并用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

7、，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　[結(jié)果]：
　　1.肝纖維化模型組大鼠血清Alb水平自造模2w后開始逐漸下降，至第8周略有回升;而ALT、AST水平隨損傷時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，在2w即開始升高，在4w達(dá)高峰，在6w開始下降;與健康對(duì)照組比較，上述各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清Alb、ALT、AST水平差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.02～20.38，P＜0.05)。
　　2.健康大鼠肝組織有g(shù)alectin-3、TGF-β1、a-SM

8、A低表達(dá)，肝纖維化模型組galectin-3、TGF-β1在2w即升高，4w達(dá)高峰，然后逐漸減弱;a-SMA在2、4、6w表達(dá)量逐漸增加，6w達(dá)高峰，8w開始下降。與健康對(duì)照組相比，肝纖維化模型組galetin-3、TGF-β1、a-SMA在2、4、6、8 w各時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.59～18.26，P＜0.05)。
　　3.相關(guān)性分析顯示，肝臟galectin-3水平與TGF-β1、a-SMA的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r=0