新型骨靶向納米給藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥是一種以骨組織微結(jié)構(gòu)的退變、骨量降低、骨脆性增加以及繼發(fā)骨折危險(xiǎn)性增加為主要特征的骨骼系統(tǒng)疾病，是目前世界上中老年人中發(fā)病率、死亡率較高且保健費(fèi)用消耗較大的疾病之一。目前臨床上用于骨質(zhì)疏松癥治療的藥物多為抑制骨轉(zhuǎn)換藥物，臨床作用為抑制破骨細(xì)胞從而降低人體的骨量丟失，但卻無法逆轉(zhuǎn)骨量，修復(fù)已經(jīng)遭到破壞的骨組織。他汀類藥物是臨床上常用的降脂藥物之一，但是近期研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物同時(shí)還具有強(qiáng)大的成骨分化促進(jìn)作用，這為骨質(zhì)疏松癥的治療開

2、辟了一條新的途徑。但是作為一類水難溶性藥物，他汀類藥物在人體內(nèi)的生物利用度較低，且骨組織分布較少，要達(dá)到骨組織治療效果增大給藥劑量又勢必會引起其他組織器官的毒副反應(yīng)，臨床應(yīng)用難度較大。因此亟需開發(fā)一個(gè)適合他汀類藥物的骨靶向載體。
　　本研究擬構(gòu)建一種以聚（乳酸-羥基乙酸）共聚物((poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)為材料的聚合物納米粒，并通過四環(huán)素（Tetracycline，TC）進(jìn)行表面修飾，

3、利用四環(huán)素的骨沉積能力，使載體具備骨組織靶向性能，希望以此實(shí)現(xiàn)對抗骨質(zhì)疏松癥藥物辛伐他汀（Simvastain, SIM）的有效骨組織遞送。將PLGA2000的末端羧基與骨靶向基團(tuán)四環(huán)素的羥基進(jìn)行酯化反應(yīng)嫁接，得到四環(huán)素—聚（乳酸—羥基乙酸）嫁接物(TC-PLGA2000)。采用核磁共振氫譜，確證嫁接物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。以辛伐他汀為模型藥物，采用乳化溶劑揮發(fā)法制備藥物PLGA納米粒。通過粒徑儀的測定和透射電鏡的觀察，制備的辛伐他汀PLGA納米

4、粒粒徑均為200nm左右，且四環(huán)素的嫁接對納米粒的粒徑?jīng)]有顯著影響;包封率測定結(jié)果顯示，辛伐他汀能被PLGA材料有效包封，四環(huán)素嫁接前后納米粒的藥物包封率均可達(dá)到75％以上。體外釋放結(jié)果顯示，PLGA納米粒對藥物具有緩釋作用，釋放呈現(xiàn)“先快后慢”的特點(diǎn)，前12h累積釋放量為60％左右，72h后超過85％，且四環(huán)素嫁接對納米粒的藥物釋放行為沒有影響。采用小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14細(xì)胞系（MC3T3-E1 subclone14）作為研究體外

5、成骨誘導(dǎo)分化的模型細(xì)胞。四唑藍(lán)比色(MTT)法測定納米粒的細(xì)胞毒性。研究結(jié)果表明，空白納米粒在1-100μg/ml的濃度范圍內(nèi)，細(xì)胞存活率接近100％，生物相容性良好。辛伐他汀載藥納米粒相比游離藥物，可以有效降低藥物的細(xì)胞毒性，并且四環(huán)素的嫁接對納米粒的毒性沒有影響。異硫氫基熒光素(Fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記PLGA納米粒研究細(xì)胞的納米粒攝取能力。研究結(jié)果表明，PLGA納米粒能較好的被細(xì)胞攝取，2

6、4小時(shí)普通納米粒的細(xì)胞攝取率為8.91％，而靶向納米粒的細(xì)胞攝取率為6.67％，四環(huán)素嫁接后納米粒的細(xì)胞攝取能力略有減弱。茜素紅染色法研究辛伐他汀載藥納米粒對細(xì)胞的成骨分化作用。研究結(jié)果表明，普通及靶向載藥納米粒均能達(dá)到與游離藥物相同的誘導(dǎo)細(xì)胞成骨分化效果，PLGA納米載體對辛伐他汀的成骨細(xì)胞誘導(dǎo)能力沒有影響。并且隨著藥物濃度的增大，納米粒誘導(dǎo)成骨分化的能力也會隨之增強(qiáng)。
　　本研究采用異硫氫基熒光素?zé)晒鈽?biāo)記PLGA納米粒，研究納

7、米粒的體外骨組織靶向能力。研究結(jié)果表明，骨靶向PLGA納米粒的羥基磷灰石親和能力能夠比普通納米粒提高近4.88倍。采用DiR熒光染料（1，1'-dioctadecyl-3，3，3'，3'-tetrarethylindotricarbocyanine Iodide，DiR）熒光標(biāo)記PLGA納米粒，研究納米粒的體內(nèi)分布。研究結(jié)果顯示，骨靶向PLGA納米粒在骨組織中的分布能夠比普通納米粒提高80.6％，并且可以有效降低納米粒在非靶向組織中的分