酒速愈對急性酒精中毒小鼠解酒作用及其保護(hù)機制研究.pdf

1、在建立急性酒精中毒小鼠模型基礎(chǔ)上，通過動物實驗，探討酒速愈對急性酒精中毒小鼠的解酒作用及其保護(hù)機制，為治療急性酒精中毒的臨床用藥提供實驗依據(jù)。 方法第一部分：酒速愈對急性酒精中毒小鼠解酒促醒作用及其酒精代謝的影響1.酒速愈預(yù)防性給藥對急性酒精中毒小鼠醉酒時間、醉酒率的影響健康昆明種小鼠，雌雄各半，隨機分為4組：模型組(灌服等容積生理鹽水)、酒速愈低劑量組(灌服酒速愈16.2g生藥/Kg體重)、酒速愈高劑量組(灌服酒速愈32.4g

2、生藥/Kg體重)、葛花解酲湯組(灌服葛花解酲湯13.1g生藥/Kg體重)，每組20只。各組小鼠禁食12h，各治療組均一次性給藥，30min后4組均以14ml/Kg體重56°紅星二鍋頭酒灌胃。觀察記錄小鼠醉酒時間(從清醒到翻正反射消失的時間)，計算24h內(nèi)的醉酒率。小鼠醉酒與否以翻正反射是否消失為標(biāo)準(zhǔn)：小鼠灌酒后將其背向下輕輕放入鼠籠，若小鼠背向下的姿勢保持30秒以上，則認(rèn)為翻正反射消失，即為醉酒。 2.酒速愈治療性給藥對急性酒精

3、中毒小鼠醒酒時間和死亡率的影響動物分組、用藥情況同前，每組20只。各組小鼠禁食12h后，均以16ml/Kg體重56°紅星二鍋頭酒灌胃，30min后各治療組分別一次性給藥，模型組灌服等容積生理鹽水。觀察記錄小鼠醒酒時間(從翻正反射消失到清醒的時間)，計算24h內(nèi)的死亡率。 3.酒速愈治療性給藥對急性酒精中毒小鼠血清乙醇濃度和肝組織和胃組織ADH活性的影響小鼠隨機分為5組：正常組、模型組(灌服等容積生理鹽水)、酒速愈低劑量組(灌服酒

4、速愈16.2g生藥/Kg體重)、酒速愈高劑量組(灌服酒速愈32.4g生藥/Kg體重)、葛花解酲湯組(灌服葛花解酲湯13.1g生藥/Kg體重)，每組16只。各組小鼠禁食12h，除正常組外，均以14ml/Kg體重56°紅星二鍋頭酒灌胃，30min后各治療組分別給藥，模型組灌服等容積生理鹽水。6h后，眼眶取血并處死小鼠，立即剖取肝臟和胃。肝臟去包膜，胃去內(nèi)容物并經(jīng)預(yù)冷的生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，濾紙吸干、稱重，按1∶10加入預(yù)冷的1.15％氯化鉀

5、溶液分別制成肝、胃組織勻漿。 參照文獻(xiàn)方法測定肝組織、胃組織ADH活性和血清乙醇濃度。ADH活性以每1g組織每1min生成的ADH的nmol數(shù)表示。 數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，用SPSSforWindows11.5統(tǒng)計軟件處理，多組比較先采用單因素方差分析，然后用Student-NewmanKeulsTest進(jìn)行每兩組間比較，顯著性差異水平以0.05和0.01為標(biāo)準(zhǔn)。 第二部分：酒速愈對急性酒精中毒小

6、鼠氧化損傷的影響動物分組、用藥情況、模型復(fù)制以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法同乙醇濃度檢測。D活性，組織 第三部分：酒速愈對急性酒精中毒小鼠胃粘膜的保護(hù)作用研究動物分組、用藥情況、模型復(fù)制以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法同第二部分。給藥6h后斷頭，剖腹取胃，沿胃大彎剪開，生理鹽水漂洗，濾紙吸干，先肉眼觀察胃粘膜的大體情況，再剪取部分胃竇組織，4％多聚甲醛固定，HE染色，光鏡下觀察胃粘膜的病理組織學(xué)的變化；刀片刮取其余胃粘膜組織并稱重，冰浴下制備10％組織勻漿，

7、3000r/min離心15min，取上清，-20℃以下保存，留作NO、ET-1、TNF-α、IL-8、PGE2檢測(小鼠分批取材檢測)。用硝酸還原酶法測定胃粘膜NO含量；用放射免疫法測定ET-1、TNF-α、IL-8、PGE2含量，并用蛋白含量校正。 第四部分：酒速愈對急性酒精中毒小鼠肝臟的保護(hù)作用研究動物分組、用藥情況、模型復(fù)制以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法同第二部分。 第五部分：酒速愈對急性酒精中毒小鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響動物分組、用

8、藥情況、模型復(fù)制以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法同第二部分。給藥1h后斷頭處死小鼠，在冰浴中迅速取腦，剝離海馬及紋狀體。采用熒光分光光度法測定紋狀體內(nèi)DA、5-HT含量；用化學(xué)比色法測定腦海馬AchE含量。 結(jié)論1.酒速愈治療急性酒精中毒的療效確切，可明顯降低小鼠醉酒率、死亡率，延長醉酒時間，縮短醒酒時間，具有顯著的解酒促醒作用，并可升高急性酒精中毒小鼠肝、胃組織的ADH活性，降低血清乙醇濃度。 2.酒速愈能顯著升高模型小鼠血清、胃

9、粘膜、腦組織、肝組織SOD活性，降低MDA含量，具有抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，抗氧化作用，通過調(diào)節(jié)和改善自由基代謝，減輕急性酒精中毒的氧化損傷。 3.酒速愈可降低急性酒精中毒模型小鼠胃粘膜的ET-1含量，提高NO含量，通過調(diào)節(jié)二者的比例，改善胃粘膜微循環(huán)，促進(jìn)局部血流供應(yīng)，從而減輕急性酒精中毒時胃粘膜損傷。 4.酒速愈可降低急性酒精中毒模型小鼠胃粘膜TNF-α、IL-8炎性介質(zhì)的含量，并能升高胃粘膜PGE2含量，通過減少炎性介

10、質(zhì)，加強胃粘膜的粘液——碳酸氫鹽屏障，從而減輕急性酒精中毒時胃粘膜的損傷。 5.酒速愈可降低急性酒精中毒模型小鼠肝組織中TNF-α、IL-8炎性介質(zhì)的含量，通過減少炎性介質(zhì)，減輕急性酒精中毒時肝臟的損傷，并可顯著降低血清中AST、ALT活性，對肝臟具有保護(hù)作用。 6.酒速愈可降低急性酒精中毒模型小鼠腦紋狀體中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA和5-HT和海馬AchE的含量，通過調(diào)節(jié)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)的含量，改善醉酒時嗜睡、激動等神經(jīng)行為學(xué)異