酒精中毒對(duì)急性肺損傷易感性研究和ACEI對(duì)酒精中毒大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 首先通過(guò)建立酒精中毒，觀察血漿、肺泡灌洗液中IL—6和VEGF變化和肺臟病理改變，探討酒精中毒對(duì)肺臟是否有損害。然后在酒精中毒基礎(chǔ)上用內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷模型，觀察肺組織中IL—6、VEGF、MCP—1和STAT3變化，研究有慢性酒精中毒史是否對(duì)急性肺損傷有易感性。最后用卡托普利干預(yù)治療酒精中毒大鼠急性肺損傷，通過(guò)觀察血?dú)夂头螡?干比值等生理指標(biāo)，以及肺臟病理改變和肺臟免疫組化結(jié)果，研究血管轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)對(duì)酒精

2、中毒大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用。 方法： 首先Wistar大鼠按經(jīng)典的酒精性肝病的制作方法，用灌胃的方法建立酒精中毒模型，然后經(jīng)靜脈注射LPS誘導(dǎo)ALI/ARDS大鼠模型，隨后加入卡托普利干預(yù)治療。將70只大鼠隨機(jī)分三個(gè)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)一：對(duì)照組和酒精中毒組； 實(shí)驗(yàn)二：(1)對(duì)照組，(2)LPS組，(3)酒精中毒+LPS組；后兩組分為2h和6h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)三：(1)對(duì)照組，(2) LPS組，(3)酒精中毒+

3、LPS組，(4) Cap+LPS組，(5)Cap+酒精中毒+LPS組；觀察各組生理指標(biāo)，在6h測(cè)定肺組織濕/干比值；通過(guò)蘇木精—伊紅(HE)染色；ELISA法測(cè)大鼠血漿和肺泡灌洗液中IL—6和VEGF含量以及肺組織中IL—6、VEGF和MCP—1含量變化；免疫組化法測(cè)定肺組織VEGF的表達(dá)以及Western Blotting測(cè)定STAT3的活性。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)一(1)動(dòng)脈血?dú)夥治觯簩?duì)照組和酒精中毒組無(wú)顯著差別。(2)酒精

4、中毒組血漿和肺泡灌洗液IL—6的表達(dá)比較對(duì)照組明顯增加(p<0.01)。酒精中毒組血漿VEGF較對(duì)照組明顯增加(p<0.01)，而肺泡灌洗液VEGF較對(duì)照組明顯降低(p<0.01)。(3)酒精中毒組比較對(duì)照組肺泡有輕微的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。實(shí)驗(yàn)二(1)動(dòng)脈血?dú)夥治觯涸贚PS組和酒精中毒+LPS組中各時(shí)間點(diǎn)氧分壓和氧合指數(shù)與對(duì)照組相比明顯降低，而酒精中毒+LPS組與LPS組相比顯著降低；PH值、二氧化碳分壓在2h的LPS組和酒精中毒+LPS組中

5、與對(duì)照組比較有顯著差異。而LPS組與酒精中毒+LPS組相比差異無(wú)顯著性。(2)肺濕、干重、肺濕/干比值：LPS組和酒精中毒+LPS組各時(shí)間點(diǎn)肺濕、干重、肺濕/干比值均較對(duì)照組顯著增加；在2h時(shí)酒精中毒+LPS組與LPS組比較差異顯著(p<0.05)。(3)LPS組和酒精中毒+LPS組肺組織VEGF的表達(dá)較對(duì)照組明顯降低(p<0.01)，酒精中毒+LPS組與LPS組比較差異顯著(p<0.01)；IL—6和MCP—1在對(duì)照組肺組織無(wú)表達(dá)，I

6、L—6在LPS組和酒精中毒+LPS組比較對(duì)照組顯著增高(p<0.01)，在2h時(shí)酒精中毒+LPS組與LPS組比較差異顯著(p<0.05)；MCP—1在LPS組和酒精中毒+LPS組較對(duì)照組顯著增高(p<0.01)，酒精中毒+LPS組與LPS組比較有顯著差異(2h，p<0.01；6h，p<0.05)(4) Western blotting法測(cè)定磷酸化的STAT。蛋白表達(dá)：LPS組(2h)，LPS組(6h)，酒精中毒+LPS組(2h)，酒精中

7、毒+LPS組(6h)較對(duì)照組活性增加。實(shí)驗(yàn)三(1)動(dòng)脈血?dú)夥治觯航o大鼠腹腔注射Cap后，動(dòng)脈血氧分壓、二氧化碳分壓、PH值和氧合指數(shù)與LPS組和LPS+酒精中毒組相比各時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的改善。在LPS+酒精中毒組中氧分壓和氧合指數(shù)明顯降低。各組尤以2h降低明顯(p<0.01)。(2)肺組織病理學(xué)變化肉眼觀察：對(duì)照組肺呈淡粉紅色，無(wú)充血、出血、水腫及壞死灶；LPS+酒精中毒組(6h)肺呈暗紅色，肺組織體積增大、明顯充血、水腫、并見(jiàn)廣泛的

8、點(diǎn)狀或灶狀出血，切口有粉紅色泡沫樣液體滲出；Cap+LPS+酒精中毒組(6h)肺充血、出血、水腫明顯減輕，切面見(jiàn)少許泡沫樣液體溢出。光鏡觀察：對(duì)照組見(jiàn)肺組織結(jié)構(gòu)清晰、肺泡壁薄、光滑，肺泡隔均勻一致；LPS+酒精中毒組(6h)見(jiàn)肺灶性出血、肺泡和肺間質(zhì)水腫、大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡壁明顯增厚，部分切片可見(jiàn)灶性肺不張、肺氣腫，但均未見(jiàn)透明膜形成，考慮與病程短有關(guān)；Cap+LPS+酒精中毒組(6h)見(jiàn)肺泡腔內(nèi)滲出及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕。(3)肺

9、濕、干重、肺濕/干比值：給Cap組6h肺濕、干重、肺濕/干比值較LPS組和LPS+酒精中毒組均有改善(p<0.01和p<0.05)。(4)在LPS組肺組織VEGF的表達(dá)較對(duì)照組明顯降低(p<0.01)，在酒精中毒+LPS組中大鼠的VEGF降低最顯著(P<0.01)，給予Cap組肺組織VEGF的表達(dá)比較LPS組和酒精中毒+LPS組顯著增高(p<0.01)。MCP—1在對(duì)照組肺組織無(wú)表達(dá)，MCP—1在LPS組和酒精中毒+LPS組較對(duì)照組顯著

10、增高(p<0.01)，給予Cap則明顯下降(p<0.01)。肺組織VEGF與MCP—1的表達(dá)呈顯著正相關(guān)r=0.386，p<0.05。(5)免疫組織化學(xué)結(jié)果：肺組織VEGF陽(yáng)性染色為棕黃色。對(duì)照組：肺泡上皮細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞胞漿有棕黃色或黃色顆粒沉著。酒精中毒+LPS組(6h)：肺泡上皮細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞胞漿有稀少的陽(yáng)性反應(yīng)物沉積，多為點(diǎn)樣沉積，著色較淡，但炎性細(xì)胞(主要為肺泡巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞)有較明顯的棕黃色或黃色顆粒沉著。Cap

11、+LPS+酒精中毒組(6h)：較LPS組肺泡上皮細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞胞漿染色要深，但炎性細(xì)胞染色明顯減弱。 結(jié)論： 實(shí)驗(yàn)一：(1)慢性酒精中毒可以對(duì)肺組織引起損害，使炎癥介質(zhì)水平上調(diào)，但并不能引起急性肺損傷。(2)慢性酒精中毒對(duì)肺功能有一定影響，使氧分壓和氧合指數(shù)同步下降，雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但慢性酒精中毒也可以造成輕微肺損害。導(dǎo)致肺臟氣體交換功能低下。 實(shí)驗(yàn)二：(1)從實(shí)驗(yàn)我們可以看出，有慢性酒精中毒基礎(chǔ)的大鼠對(duì)急性

12、肺損傷更加敏感，也就是說(shuō)，有慢性酒精中毒基礎(chǔ)的大鼠易患急性肺損傷，而且損傷的程度較沒(méi)有慢性酒精中毒基礎(chǔ)的嚴(yán)重。(2)實(shí)驗(yàn)表明，在急性肺損傷初始階段，即急性肺損傷2小時(shí)的損傷程度較6小時(shí)表現(xiàn)明顯加重。(3)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明在LPS和酒精中毒時(shí)JAK/STAT信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制發(fā)揮作用。 實(shí)驗(yàn)三：(1)Cap對(duì)ARDS的干預(yù)治療，從VEGF和MCP—1的表達(dá)，從病理切片和免疫組化觀察，提示Cap可明顯減輕了急性肺損傷的炎癥反應(yīng)，而在酒精中毒基