牙周病基礎(chǔ)治療前后齦下菌群動態(tài)觀察.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文牙周病基礎(chǔ)治療前后齦下菌群動態(tài)觀察姓名：張冬梅申請學位級別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：潘亞萍20030301菌斑全細菌D N A ，溶于6 0 心T E 。取5 出測量D N A 純度及濃度，其余置一2 0 ％冰箱保存。紫外分光光度儀分別測量2 6 0 n m 和2 8 0 n m 處吸光度值及比值。比值界于1 ．7 —2 ．0 之間，表示D N A純度較好。按公式：D N A 濃度( 斗g ／出) = (

2、 A ⅫX 5 0 ×稀釋倍數(shù)) ／1 0 0 0 ，對D N A 進行定量分析。6 ．P C R 擴增：1 6 Sr D N A 通用引物擴增全細菌1 6 Sr D N A 序列。設(shè)計含G C 夾的引物，使擴增后的P C R 產(chǎn)物在濃度遞增的變性梯度凝跤中始終保持分叉狀結(jié)構(gòu)。1 ％瓊脂糖凝膠電泳檢測P C R 產(chǎn)物。7 ．變性梯度凝膠電泳( D G G E ) 觀察齦下菌群D N A 圖譜。7 ．1 垂直D G C - E

3、：制備0 ～1 0 0 ％垂直變性梯度凝膠，檢測最適解鏈條件( 即變性濃度) 。7 ．2 平行D G G E ：根據(jù)垂直D G G E 檢測到的解鏈區(qū)域變性濃度，制備相應(yīng)變性范圍的平行梯度凝膠。動態(tài)觀察治療前后齦下菌群D N A 圖譜。7 ．3 選擇特異條帶進行切膠、測序分析：選擇治療后減弱、消失的兩個D N A 條帶和治療后新出現(xiàn)的兩個條帶，切膠、回收、克隆、純化、測序。結(jié) 果1 ．牙周基礎(chǔ)治療前后臨床指標的變化1 ．1 2 6 例成