福賽斯坦納菌在齦下菌斑中的分布及定量分析.pdf

1、福賽斯坦納菌是慢性牙周炎重要的致病菌，但該菌在中國(guó)牙周健康者和慢性牙周炎患者中的分布情況還不清楚，福賽斯坦納菌數(shù)量水平與不同牙周狀況相關(guān)性的研究也較少。本研究分兩部分分析了中國(guó)牙周健康者和慢性牙周炎患者齦下菌斑中福賽斯坦納菌的檢出率及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系；建立了TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量檢測(cè)齦下菌斑中福賽斯坦納菌和總細(xì)菌量的方法，分析了細(xì)菌負(fù)荷與牙周狀況的關(guān)系。 1、采用16S rRNA PCR 方法對(duì)111例牙周健康者、

2、108例慢性牙周炎患者共327個(gè)齦下菌斑樣本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，健康者健康位點(diǎn)福賽斯坦納菌的檢出率10.8％，低于牙周炎病變位點(diǎn)福賽斯坦納菌檢出率56.5％(P<0.001)。牙周炎患者相對(duì)健康位點(diǎn)福賽斯坦納菌檢出率為3.7％，低于牙周炎病變位點(diǎn)(P<0.001)和健康者健康位點(diǎn)(P<0.05)。提示齦下菌斑中福賽斯坦納菌的存在與牙周炎癥的發(fā)生有密切關(guān)系。 2、慢性牙周炎患者齦下菌斑樣本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，隨著牙周袋探診深度和臨床附著喪失的增加，福

3、賽斯坦納菌的檢出率也升高，其 spearman 相關(guān)系數(shù)分別為0.46和O.52(P<0：001和P<0.05)。探診出血位點(diǎn)福賽斯坦納菌的檢出率為60.2％，明顯高于不出血位點(diǎn)的檢出率7.3％(P<0.001)。提示福賽斯坦納菌在牙周的定植與牙周炎破壞程度、疾病活動(dòng)性有密切關(guān)系。 3、為獲得實(shí)時(shí)熒光定量PCR絕對(duì)定量的標(biāo)準(zhǔn)品，利用pMDl8-T載體，通過T-A克隆技術(shù)，構(gòu)建含有福賽斯坦納菌和真細(xì)菌靶基因的重組質(zhì)粒。從含X-ga

4、l/IPTG的LB固體培養(yǎng)基上的藍(lán)白斑篩選結(jié)果可以看到，福賽斯坦納菌重組質(zhì)?？股睾Y選平板上全為白斑，沒有出現(xiàn)蘭斑；而真細(xì)菌重組質(zhì)?？股仄桨迳纤{(lán)斑少而白斑多，且從幾個(gè)白斑中提取到的質(zhì)粒DNA凝膠電泳及測(cè)序鑒定，結(jié)果顯示均含有目的片段，表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，該構(gòu)建重組質(zhì)粒的方法簡(jiǎn)便而高效。 4、采用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR，對(duì)樣本中福賽斯坦納菌的數(shù)量和總菌量進(jìn)行定量檢測(cè)，并獲得福賽斯坦納菌在齦下菌斑中的比例。用含有福賽斯坦

5、納菌和真細(xì)菌靶基因的重組質(zhì)粒建立定量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示所設(shè)計(jì)的引物和探針具有良好的特異性及敏感性，可檢測(cè)的質(zhì)粒DNA濃度為10<'2>～10<'7>拷貝/μl(r=0.99)，該定量檢測(cè)細(xì)菌的方法簡(jiǎn)單而快捷。慢性牙周炎患者病變位點(diǎn)福賽斯坦納菌數(shù)量和總菌量均比健康者健康位點(diǎn)高(P<0.001)，福賽斯坦納菌在齦下菌斑中的比例也比健康位點(diǎn)高(P<0.05)；細(xì)菌數(shù)量與探診深度間呈正相關(guān)(P<0.001)，福賽斯坦納菌與PD的相關(guān)系數(shù)r=0.78

6、，總細(xì)菌與PD的相關(guān)系數(shù)r=0.61；深牙周袋中有高水平的細(xì)菌定植，但不同牙周袋探診深度之間，福賽斯坦納菌在齦下菌斑中的比例沒有顯著差異(P>0.05)。提示齦下菌斑中福賽斯坦納菌的數(shù)量水平與牙周狀況有密切關(guān)系。 綜上所述，本研究對(duì)中國(guó)漢族牙周健康者和慢性牙周炎患者齦下菌斑福賽斯坦納菌檢測(cè)，證實(shí)了福賽斯坦納菌與中國(guó)人牙周炎發(fā)生及疾病嚴(yán)重程度有密切關(guān)系；并建立了TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量檢測(cè)齦下菌斑中福賽斯坦納菌和總菌量的