孕婦血漿游離DNA的定量分析及在產前診斷中的應用.pdf

1、本實驗擬建立熒光定量PCR檢測3一磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因和男性特有Y性別決定區(qū)(sexdetermining region Y，SRY)基因的方法；分析孕婦血漿DNA片段長短的分布情況；檢測不同孕周孕婦、未孕女性、異常妊娠孕婦血漿中不同來源的游離DNA含量及變化情況；探討熒光PCR方法在檢測胎兒性別等產前診斷中以及孕婦血漿游離DNA的定量分析在唐氏篩查和非創(chuàng)傷性產前診斷中的價值。 材料與方法 1、研究對象：本

2、實驗自2004年9月到2005年7月共收集成都市錦江區(qū)婦產科醫(yī)院就診的孕中期、孕晚期及唐氏高危孕婦共80例外周血標本。其中，孕中期42例，唐氏高危21例，孕晚期17例。5例未孕且無妊娠史的健康女性作為陰性對照，1例正常健康男性作為陽性對照。 2、實驗方法：根據GAPDH和SRY序列設計合成特異性引物和探針；提取正常男性外周血細胞DNA，進行目的基因的常規(guī)PCR擴增，回收純化PCR產物，分別將兩種PCR產物與T載體連接，轉化JM1

3、09大腸桿菌中，在LB中培養(yǎng)，提取質粒，經PCR和序列測定等方法鑒定克隆成功后制備成陽性定量標準模板，建立了1個檢測GAPDH基因及4個SRY基因的熒光定量PCR方法。兩種方法分別檢測孕婦血漿中不同來源的DNA片段長度。熒光PCR方法檢測未孕女性、孕中期孕婦、唐氏高危孕婦和孕晚期孕婦血漿游離DNA中GAPDH含量和SRY基因的有無及含量變化。統計方法：采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析統計方法。 結論 1、熒光定量PCR

4、檢測孕婦血漿DNA中GAPDH、SRY具有簡便、快速、高靈敏性、高特異性等優(yōu)點；且閉管操作有效避免了PCR產物的污染；結果用拷貝數表 示，有利于對不同孕期血漿DNA含量變化進行直接的分析和比較。 2、孕婦血漿中胎源性DNA片段長度遠小于母源性DNA；異常妊娠及隨著孕周的增加使得胎兒DNA在片段長短等理化性質上產生了一定改變；血漿DNA理化性質分析在后續(xù)的PCR引物設計和胎兒DNA的富集具有重要的指導意義。 3、孕婦血漿