生物活性玻璃對(duì)三種細(xì)胞及齦下菌斑的抗菌效果研究.pdf

1、牙周病是人類口腔中兩大最常見的疾病之一，也是成年人失牙的首位原因。牙菌斑生物膜的細(xì)菌及其產(chǎn)物是引發(fā)牙周病必要的始動(dòng)因子。如何抑制菌斑形成和清除菌斑是控制牙周病的重要議題。生物活性玻璃(bioactive glass，BG)是由Hench教授1969年發(fā)明，由SiO2，Na2O，CaO，P2O5等氧化物組成，具有生物活性的新型生物材料。生物活性玻璃已證實(shí)能夠有效封閉牙本質(zhì)小管，治療牙本質(zhì)過敏癥、作為骨替代材料等。生物活性玻璃同時(shí)也具有廣泛

2、的抗菌作用。但是對(duì)于生物玻璃對(duì)菌斑的抗菌效果研究，特別是對(duì)引起牙周病的齦下菌斑的研究目前并不多見。本實(shí)驗(yàn)旨在探究生物活性玻璃對(duì)三種細(xì)菌的抑制和殺滅能力，并于體外模擬三種單菌種菌斑和早期齦下混合菌斑，探究生物活性玻璃對(duì)其抗菌效果。對(duì)比生物活性玻璃與無機(jī)抗菌劑氯己定的抗菌效果，探討生物活性玻璃的抗菌成效，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。本研究分為三個(gè)部分：
　　第一部分：生物活性玻璃對(duì)三種細(xì)菌的抗菌效果研究。
　　目的：研究生物活性玻璃作用

3、于浮游狀態(tài)和菌斑生物膜狀態(tài)的血鏈球菌、伴放線放線桿菌、具核梭桿菌的抗菌效果，對(duì)比兩種不同狀態(tài)下細(xì)菌對(duì)生物活性玻璃的易感性。
　　方法：測(cè)定生物活性玻璃對(duì)血鏈球菌、伴放線放線桿菌、具核梭桿菌的浮游狀態(tài)細(xì)菌的最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration，MIC)和最小殺菌濃度(Minimal bactericidal concentration，MBC)。于菌斑玻片上制作三種細(xì)菌的單菌種菌斑生物膜模型

4、，并測(cè)定生物活性玻璃對(duì)生物膜狀態(tài)的三種細(xì)菌的最小菌斑清除濃度(minimal biofilm eradication concentration，MBEC)。
　　結(jié)果：低濃度的生物活性玻璃能夠產(chǎn)生抑菌殺菌作用，生物活性玻璃對(duì)菌斑的MBEC明顯大于對(duì)浮游菌的MIC和MBC，MBEC為MIC的2～16倍。
　　結(jié)論：生物活性玻璃可抑制和殺滅血鏈球菌、聚合梭桿菌、伴放線放線桿菌浮游菌及其單菌種菌斑生物膜，對(duì)浮游細(xì)菌效果優(yōu)于菌斑生

5、物膜。
　　第二部分：激光共聚焦掃描顯微鏡觀察生物活性玻璃對(duì)24h早期齦下混合菌斑的抗菌效果研究。
　　目的：探究生物活性玻璃對(duì)三種細(xì)菌形成的24h早期齦下混合菌斑的抗菌效果。
　　方法：于載玻片上模擬形成24h早期齦下混合菌斑，20、40、80 mg/mL的生物活性玻璃和惰性玻璃二氧化硅(SiO2)處理后染色，于激光共聚焦顯微鏡(confocal laser scanning microscopy，CLSM)下攝片觀

6、察分析生物膜厚度和平均熒光強(qiáng)度。
　　結(jié)果：隨著生物活性玻璃濃度加大，混合菌斑生物膜厚度變薄，團(tuán)塊減小，菌斑活性比減低，與空白對(duì)照組和陽性對(duì)照SiO2組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論：生物活性玻璃對(duì)早期齦下混合菌斑有一定抗菌效果，且濃度越高，抗菌效果越好。
　　第三部分：生物活性玻璃與氯己定對(duì)伴放線放線桿菌抗菌效果對(duì)比。
　　目的：對(duì)比生物活性玻璃與氯己定(Chlorhexidine，CHX)對(duì)伴放

7、線放線桿菌的抗菌效果
　　方法：測(cè)定生物活性玻璃和氯己定對(duì)伴放線放線桿菌的最小抑菌濃度(Minimalinhibitory concentration，MIC)、最小殺菌濃度(Minimal bactericidalconcentration，MBC)和最小菌斑清除濃度(minimal biofilm eradicationconcentration，MBEC)。于玻片上培養(yǎng)形成伴放線放線桿菌單菌種菌斑生物膜，1/2MBEC和1M

8、BEC的生物活性玻璃和氯己定作用于菌斑10min，平板計(jì)數(shù)觀察細(xì)菌活性。
　　結(jié)果：生物活性玻璃和氯己定的MBEC大于對(duì)浮游菌的MIC和MBC，MBEC為各自MIC的4倍和8倍，1MBEC作用下生物活性玻璃與氯己定組細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(＜0.05)，生物活性玻璃組菌斑活性低于氯己定組;1/2MBEC組對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：低濃度生物活性玻璃和氯己定即可對(duì)伴放線放線桿菌產(chǎn)生抗菌效果，生物活性玻璃對(duì)菌斑生物膜的抗菌