三種中藥對人胃癌細(xì)胞體外抗腫瘤活性及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、研究目的：
　　 1.比較石見穿、核桃楸和葉下珠三藥的水提取液、乙醇提取液和水提醇沉提取液的藥物獲得率；
　　 2.觀察石見穿、核桃楸和葉下珠三藥的水提取液、乙醇提取液和水提醇沉提取液不同濃度對人體胃癌細(xì)胞株BGC-823的影響；
　　 3.觀察石見穿、核桃楸和葉下珠三藥的水提取液、乙醇提取液和水提醇沉提取液不同濃度對人體胃癌細(xì)胞株MKN-28的影響；
　　 4.研究葉下珠水提取液對BGC-823細(xì)胞的凋

2、亡影響。
　　 研究方法：
　　 1.藥物制備：采用熱回流提取法分別制備石見穿、核桃楸和葉下珠的水提取液、醇提取液、水提醇沉液。
　　 2.細(xì)胞增殖抑制實驗：采用MTT法取處于指數(shù)生長期的人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28，加入適量0.25％胰酶消化，用含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成懸液，計數(shù)并種板，每孔加細(xì)胞懸液160μl，培養(yǎng)24小時。將藥液40μl分別加入各孔細(xì)胞懸液中，每個劑量重復(fù)4孔

3、.將含人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28的細(xì)胞板孵育48小時后取出，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，37℃溫育4h，吸出上清液，加入200μl的DMSO，混懸儀混勻后用酶標(biāo)儀測定每孔光密度(OD)。計算生存率=實驗組OD/對照組OD×100％，抑制率=(1-實驗組OD/對照組OD)×100％。
　　 3.形態(tài)學(xué)觀察：用不同濃度的石見穿、核桃楸和葉下珠的水提取液、醇提取液、水提醇沉液處理人胃癌細(xì)胞株BGC-823和

4、MKN-28后，在倒置顯微鏡下觀察用藥組細(xì)胞形態(tài)變化，并拍照。
　　 4.細(xì)胞凋亡測定：取處于指數(shù)生長期的人胃癌細(xì)胞株BGC-823加不同濃度葉下珠水提取液培養(yǎng)48小時后，用適量0.02％EDTA進(jìn)行消化制成單細(xì)胞懸液，2000r/min離心，PBS平衡鹽溶液洗滌2次，配成1×106/ml細(xì)胞懸液，75％冷乙醇-20℃固定，上機(jī)測定前，離心去乙醇，PBS平衡鹽溶液洗滌2次，用0.5ml的PBS懸浮細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，加入PI染液0

5、.5ml，4℃避光染色30分鐘以上，經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾后，上流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞的含量。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.同等條件下藥物獲得率為核桃楸>石見穿>葉下珠。
　　 2.石見穿、葉下珠、核桃楸三種提取液在作用于胃癌BGC-823、MKN-28細(xì)胞48小時時，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞的存活率下降。這三種中藥對BGC-823、MKN-28細(xì)胞而言，均具有濃度依賴作用。
　　 3.石見穿、葉下珠、核桃

6、楸提取液在作用于胃癌BGC-823、MKN-28細(xì)胞48小時時，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞的抑制率逐漸上升。這三種中藥在0.0625mg/ml-1mg/ml時對細(xì)胞均有抑制作用。
　　 4.石見穿、葉下珠、核桃楸提取液在作用于胃癌BGC-823、MKN-28細(xì)胞48小時時，細(xì)胞生長受到抑制，且葉下珠的乙醇提取液抑制作用最強(qiáng)。
　　 5.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化正常情況下，人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28呈多角形，貼壁生長。在

7、三種中藥的作用下，癌細(xì)胞逐漸變圓，皺縮，貼壁細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞腫脹，大小不一致，細(xì)胞間隙增寬。
　　 6.葉下珠水提取液濃度在0.25mg/ml～lmg/ml對人胃癌細(xì)胞BGC-823均有明顯的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，流式細(xì)胞儀可檢測到凋亡峰。
　　 結(jié)論：
　　 1.同等條件下藥物獲得率為核桃楸>石見穿>葉下珠。
　　 2.核桃楸、葉下珠和石見穿在體外具有抑制人胃癌細(xì)胞株BGC-823和MKN-28增殖的作用