姜類中藥抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:隨著中醫(yī)學(xué)對(duì)于癌癥治療的深入探索,中醫(yī)藥在提高腫瘤患者生存質(zhì)量和延長(zhǎng)生存時(shí)間等方面得到廣泛的運(yùn)用,中西醫(yī)結(jié)合療法在癌癥治療領(lǐng)域被眾醫(yī)家所肯定。近年來,許多臨床及實(shí)驗(yàn)研究顯示,姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜等在抑制腫瘤病的進(jìn)展、減輕放化療毒副作用等方面作用具有明顯優(yōu)勢(shì)。
　　 目的:本課題旨在研究姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞、肺癌A549細(xì)胞的體外抗癌作用以及對(duì)抗癌機(jī)制進(jìn)行初探,為臨床辨病辨證

2、合理有效使用姜類中藥提供一定實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　 方法:采用MTT,3H-TdR摻入法觀察姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜煎劑以及姜類中藥含藥血清對(duì)胃癌SGC一7901細(xì)胞、肺癌A549細(xì)胞的體外生長(zhǎng)抑制作用。在體外抑瘤實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用AnnexinV-FITC/PI雙染法觀察姜類中藥血清誘導(dǎo)胃癌SGC一7901細(xì)胞、肺癌A549細(xì)胞凋亡作用,PI單染法觀察姜類中藥血清對(duì)肺癌A549細(xì)胞周期調(diào)節(jié)作用。
　　 結(jié)果:(

3、1)姜類中藥煎劑(干姜、炮姜、姜黃、高良姜)對(duì)肺癌A549細(xì)胞均具有一定的增殖抑制作用,干姜、炮姜、姜黃的抑制作用隨劑量的加大而逐漸增強(qiáng),均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示它們對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制作用呈濃度依賴性。(2)高良姜從10mg/ml到40mg/ml濃度對(duì)A549生長(zhǎng)的抑制作用都接近100％,無明顯濃度依賴性。(3)炮姜、高良姜在10mg/ml濃度下對(duì)A549抑制作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其他藥物在10mg/ml濃度下抑制率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,姜

4、黃在達(dá)到40mg/ml劑量后對(duì)A549的抑制作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)四藥中干姜的濃度依賴性最明顯,隨劑量上升,對(duì)A549細(xì)胞抑制作用加強(qiáng)明顯并超過炮姜,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)姜類中藥對(duì)A549的體外抑制作用強(qiáng)弱順序?yàn)樵?0mg/ml濃度下:高良姜＞炮姜＞干姜＞姜黃;在40mg/ml濃度下:高良姜＞干姜＞炮姜＞姜黃。(6)姜類中藥煎劑對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞均具有一定的抑制增殖作用,干姜、炮姜、高良姜抑制作用隨劑量的加大而逐漸增強(qiáng),均具有

5、顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示它們對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞具有增殖抑制作用,其抑制作用呈濃度依賴性。(7)姜黃對(duì)SGC-7901的抑制作用濃度依賴性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(8)高良姜在低濃度下(10mg/ml),對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的抑制作用即迅速增強(qiáng),到達(dá)平臺(tái)期(大于90％)。(9)在本實(shí)驗(yàn)中,千姜、炮姜對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的抑制作用:炮姜＞干姜,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(10)姜類中藥對(duì)SGC-7901的體外抑制作用強(qiáng)弱順序?yàn)?在20mg/ml

6、濃度下高良姜＞炮姜＞姜黃＞干姜,在40mg/ml濃度下高良姜＞炮姜、干姜＞姜黃。(11)姜類中藥含藥血清對(duì)肺癌A549細(xì)胞生有增殖抑制作用,其中以15％血清協(xié)同抑制作用最佳,此時(shí)抑制作用大小表現(xiàn)為炮姜＞姜黃＞高良姜＞干姜。(12)姜類中藥血清對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞有增殖抑制作用,其中以15％血清濃度協(xié)同抑制作用最佳,此時(shí)抑制作用表現(xiàn)為干姜＞炮姜＞高良姜＞姜黃。(13)通過AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測(cè),姜類中藥血清可誘

7、導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡,同時(shí)伴有細(xì)胞的壞死.干姜組誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用最佳,其他各組差異不明顯。(14)通過PI單染色法檢測(cè)姜類中藥血清干預(yù)肺癌A549細(xì)胞周期,各組藥物血清顯示出不同程度的G2/M期阻滯,其中以干姜組較高,炮姜組顯示出一定程度G0/G1期阻滯。(15)通過AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測(cè)胃癌SC-C-7901細(xì)胞凋亡,姜類中藥作用48h可誘導(dǎo)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡,同時(shí)伴有細(xì)胞的壞死.姜黃組誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用最

8、佳,其他各組差干姜＞炮姜＞高良姜。
　　 結(jié)論:(1)姜類中藥煎劑抑制腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)顯示:姜類中藥(干姜、炮姜、姜黃、高良姜)均有抑制肺癌A549細(xì)胞、胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖作用,對(duì)于不同細(xì)胞,其抑制作用強(qiáng)弱有不同特點(diǎn)。在10mg/ml濃度下,炮姜對(duì)于肺癌、胃癌細(xì)胞的抑制作用均大于干姜,干姜的抑制作用有明顯的濃度依賴性,隨濃度上升抑制作用顯著增強(qiáng),對(duì)于肺癌,在40mg/ml濃度下干姜優(yōu)于炮姜。姜黃較其他實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)腫瘤

9、細(xì)胞的增殖抑制作用弱,在40mg/ml濃度下對(duì)于腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高良姜在極小劑量(小于10mg/ml濃度)時(shí)即對(duì)肺癌A549細(xì)胞、胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖即有抑制作用,并迅速上升到平臺(tái)期(抑制率＞90％)。(2)姜類中藥血清抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)顯示:姜類中藥經(jīng)體內(nèi)代謝吸收后制備血清對(duì)細(xì)胞的抑制作用與生藥制劑不完全相同。在本實(shí)驗(yàn)中,姜類中藥血清總體評(píng)價(jià)以15％血清培養(yǎng)條件對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用最佳。(3)在15

10、％血清培養(yǎng)條件下,相當(dāng)于20g/日/人造模新西蘭兔的姜類中藥血清對(duì)肺癌細(xì)胞A549抑制作用:炮姜＞姜黃＞高良姜＞干姜;對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901抑制作用:干姜＞炮姜＞高良姜＞姜黃。(4)在姜類中藥血清誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示,姜類中藥具有明顯的誘導(dǎo)肺癌胃癌細(xì)胞凋亡作用。干姜對(duì)肺癌誘導(dǎo)凋亡作用大于其他藥物,姜黃對(duì)胃癌誘導(dǎo)凋亡作用大于其他藥物。姜類中藥干預(yù)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)顯示,姜類中藥抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與姜類中藥含藥血清對(duì)腫瘤細(xì)胞周期G2/M期和