熊去氧膽酸對肝腫瘤細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡及抑制增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討熊去氧膽酸(UDCA)對肝腫瘤細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡及抑制增殖的作用和機(jī)制。 方法：用四氮唑藍(lán)法檢測UDCA對肝腫瘤細(xì)胞株HepG2，BEL7402及正常肝細(xì)胞株L-02的增殖抑制作用；以流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL和DNA凝膠電泳法測定UDCA誘導(dǎo)HepG2，BEL7402及L-02細(xì)胞凋亡的作用和其對細(xì)胞株增殖周期的影響；通過Wright-Giemsa染色法、電鏡觀察經(jīng)UDCA處理后細(xì)胞形態(tài)的改變；應(yīng)用RT-PCR、wester

2、nblot和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測UDCA對上述三種細(xì)胞株的癌基因和抑癌基因bax、bcl-2、c-myc、N-ras、p21和p53表達(dá)的影響。 結(jié)果：UDCA對HepG2，BEL7402細(xì)胞株生長的抑制作用隨藥物濃度增高而增強(qiáng)(r2=0.96，P＜0.01；r2=0.97，P＜0.01；48h)。UDCA對HepG2及BEL7402的IC50分別為0.92mmol.L-1，0.86mmol.L-1。UDCA(1.0mmol.L-1

3、)對HepG2及BEL7402的凋亡率分別為42±6％及44±4％，明顯高于對照組(P＜0.01)，并且阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示：以UDCA(0.8mmol.L-1)處理HepG2后bcl-2表達(dá)由24.3±2.4％降低為10.1±1.6％，Bax表達(dá)由43±5％升高為59±3％(P＜0.01)；處理BEL7402細(xì)胞后bcl-2表達(dá)由21.6±1.8％降為11.6±2.1％，Bax表達(dá)由44±4％升高為59±3

4、％(P＜0.01)。RT-PCR結(jié)果表明：UDCA可以上調(diào)HepG2，BEL7402細(xì)胞baxmRNA的水平，下調(diào)HepG2，BEL7402細(xì)胞bcl-2、c-myc、N-rasmRNA的水平。Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：UDCA可以提高HepG2，BEL7402細(xì)胞p21和p53的基因表達(dá)水平。當(dāng)UDCA濃度大于等于0.8mmol.L-1時，可以導(dǎo)致HepG2，BEL7402細(xì)胞在DNA凝膠電泳圖譜上出現(xiàn)典型的DNA梯狀圖譜。