三氟拉嗪對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、腦血管疾病(cerebrovascular diseases)的發(fā)病率、死亡率和致殘率很高，與惡性腫瘤、心臟病并列為導(dǎo)致全球人口死亡的三大疾病，根據(jù)新近的流行病學(xué)資料，我國腦血管疾病在人口死因中居第二位，僅次于惡性腫瘤。在腦缺血再灌注損傷中鈣調(diào)蛋白(CaM)參與細(xì)胞內(nèi)多種鈣介導(dǎo)的生物代謝過程，是一種多功能的鈣結(jié)合蛋白，其作用途徑復(fù)雜多樣。目前，對于CaM在腦缺血過程中作用的研究越來越多。三氟拉嗪(Trifluoperazine，TFP)

2、作為特異性的CaM抑制劑在相關(guān)研究領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。在整體動物實驗中已證實可明顯縮小大鼠腦缺血再灌注后的梗死面積。但其保護作用機制尚不清楚。本實驗通過建立大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型，分析TFP對大鼠腦缺血的影響，包括病理學(xué)變化，海馬區(qū)長時程增強(long-term potentiation，LTP)和腦電圖(EEG)的變化，以及TFP對海馬神經(jīng)元瞬時外向鉀離子通道的影響，探討TFP的神經(jīng)保護作用及其機制。 材料與方法

3、動物實驗部分：成年雄性SD大鼠隨機分為對照組(CON)，缺血組(ISC)及TFP治療組(TFP)。采用線栓法制作大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型，缺血手術(shù)30min后，TFP組腹腔注射TFP(5mg/kg)，ISC組腹腔注射等量生理鹽水。缺血1h后，拔出線栓進行再灌注。CON組只分離血管，不進行線栓，腹腔注射等量生理鹽水。記錄左右側(cè)大腦PP-DG通路(穿通纖維一齒狀回通路)間的LTP以及腦電圖(EEG)。分析心率變異性(HRV)以及EEG的

4、樣本熵。實驗結(jié)束后，大鼠取腦，行氯化三苯基四氮唑(TTC)以及蘇木精和伊紅(HE)染色。 膜片鉗部分：9-14d SD大鼠，斷頭取腦后采用機械和酶解相結(jié)合的方法急性分離海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，靜置貼壁于蓋玻片上。阻斷鈉通道、鈣通道和延遲整流鉀通道，記錄瞬時外向鉀通道電流。4分鐘后，加入終濃度10<'-5>mmol/L的TFP，記錄加藥前后電流變化。 實驗結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±S.E.M)表示，數(shù)據(jù)經(jīng)

5、t-檢驗，當(dāng)p<0.05時認(rèn)為結(jié)果有顯著性差異。 結(jié)果 1， TFP組TTC染色缺血面積明顯小于ISC組，HE染色神經(jīng)組織損傷比：ISC組輕。 2， TFP組LTP誘發(fā)率高于ISC組，雙側(cè)興奮性突觸后電位斜率和群峰電位幅值均低于ISC組。 3， TFP組EEG樣本熵在缺血側(cè)高于ISC組，在非缺血側(cè)低于ISC組。 4，海馬神經(jīng)元的膜片鉗檢測表明TFP給藥后，可促進瞬時外向鉀通道失活，抑制其失活后的恢