奶牛胚胎分割及其相關(guān)技術(shù)的研究.pdf

1、胚胎分割是胚胎工程的一項(xiàng)重要技術(shù)，可用于擴(kuò)增可用優(yōu)良胚胎的數(shù)目和生產(chǎn)同卵雙胎、同卵多胎的遺傳性狀一致的動(dòng)物。本課題對(duì)小鼠的胚胎分割和奶牛胚胎的分割與半胚移植進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。 小鼠是常用的動(dòng)物模型，它生殖周期短，廉價(jià)易得。首先對(duì)小鼠的胚胎進(jìn)行徒手分割，研究在不同分割液中采用不同的分割工具和分割方法，分割不同發(fā)育階段、不同質(zhì)量的胚胎，并對(duì)透明帶進(jìn)行處理后分割。結(jié)果除囊胚的分割成功率顯著高于桑椹胚外(91.9％，96.2％)(P＜0

2、.05)，其他各因素對(duì)胚胎分割的成功率沒有顯著差異。 分割后的半胚體外培養(yǎng)，在半胚發(fā)育方面：1.不加血清PBS液組(77.5％)顯著低于保存液、0.2M蔗糖PBS液、進(jìn)口分割液組(82.3％、84.8％、83.5％)(P＜0.05)；2.分割針組(83.7％)顯著高于分割刀組(77.6％)(P＜0.05)；3.桑椹胚組(80.8％)顯著低于囊胚組(85.2％)(P＜0.05)；4.去除透明帶組(77.7％)與透軟化組、不處理組(

3、81.9％、82.8％)均有顯著差異(P＜0.05)；5.A級(jí)胚胎組(84.8％)顯著高于B級(jí)胚胎組(73.2％)(P＜0.01)；6.二分胚的胚胎發(fā)育數(shù)(84.1％)顯著高于四分胚組(68.8％、64.1％)(P＜0.01)；7.鮮胚組(84.1％)顯著高于凍胚組(753％)(P＜0.05)。 結(jié)果表明：各因素對(duì)于胚胎分割成功率沒有顯著的影響。其影響主要表現(xiàn)在半胚的發(fā)育率方面。通過試驗(yàn)可以看出，在體視顯微鏡下，用玻璃分割針在0

4、.2M蔗糖PBS液或分割液中直接對(duì)胚胎進(jìn)行徒手分割，可獲得很高的分割成功率和半胚發(fā)育率。 本實(shí)驗(yàn)還對(duì)分割的半胚進(jìn)行冷凍，研究不同冷凍方法、冷凍前培養(yǎng)時(shí)間和解凍溫度對(duì)半胚冷凍效果的影響。結(jié)果采用常規(guī)冷凍方法，在冷凍液中加入10％T-500，效果良好；冷凍前培養(yǎng)1小時(shí)效果最好，與培養(yǎng)2小時(shí)差異不顯著，兩組顯著好于3小時(shí)組；在30℃水浴解凍效果良好。結(jié)果表明，在半胚冷凍前培養(yǎng)時(shí)間及冷凍方法、冷凍保護(hù)液對(duì)冷凍半胚的發(fā)育有顯著影響。

5、 通過對(duì)小鼠胚胎分割技術(shù)的研究，建立了胚胎分割技術(shù)平臺(tái)，在此基礎(chǔ)上對(duì)奶牛胚胎進(jìn)行分割與移植。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用FSH對(duì)高產(chǎn)荷斯坦奶牛進(jìn)行超數(shù)排卵，并對(duì)胚胎進(jìn)行分割和半胚移植，同時(shí)分割冷凍胚胎和玻璃化冷凍性控胚胎。比較了國產(chǎn)FSH和進(jìn)口FSH的超排效果，研究了新鮮胚胎、冷凍胚胎和玻璃化冷凍性控胚胎的分割成功率，并對(duì)半胚進(jìn)行移植，探討移植單半胚與雙半胚對(duì)妊娠率的影響。結(jié)果無論采用進(jìn)口還是國產(chǎn)的FSH對(duì)供體進(jìn)行超數(shù)排卵處理，差異不顯著。移植不同性質(zhì)