家兔胚胎分割的研究.pdf

1、本試驗采用FSH、PMSG、LH、hCG四種激素的不同組合對家兔進行超數(shù)排卵，并對超數(shù)排卵所采集到的8．細胞、桑椹胚、早期囊胚分別進行徒手分割和顯微分割，分割后的半胚在三種不同的培養(yǎng)液(含20％小牛血清的mPBS、DMEM、TCM-199)于37.5℃、5％CO<,2>飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。試驗結(jié)果如下： 1 FSH+hCG組合中的60單位FSH+75單位hCG組合效果最佳：排卵點、平均回收胚胎數(shù)、平均可用胚胎數(shù)分別為33.0

2、±4.60、27.92+4.46、21.75+4.33，均顯著高于40單位和80單位FSH處理組(P<0.05)。 2 不同激素的對比試驗中，F(xiàn)SH+hCG組合的平均回收胚胎數(shù)和平均可用胚胎數(shù)(27.92±4.46、21.75+4.33)顯著高于(P<0.05)FSH+LH(23.20±3.88、17.9±2.69)與PMSG+hCG組合(22.38+4.50、17.25±4.33)，排卵點差異不顯著(P>0.05)。

3、3 比較三種不同時期胚胎的分割效果及其半胚在三種不同的培養(yǎng)液(含20％小牛血清的mPBS、TCM-199、DMEM)中的發(fā)育情況。結(jié)果表明：早期囊胚分割成功率高于8-細胞胚胎分割成功率(82.18％vs 73.40％)，經(jīng)檢驗差異顯著(P<0.05)，早期囊胚與桑椹胚分割成功率差異不顯著(P>0.05)，桑椹胚與8-細胞胚胎分割成功率差異也不顯著(P>0.05)。8-細胞、桑椹胚、早期囊胚經(jīng)分割后半胚體外培養(yǎng)發(fā)育至囊胚的比率三者依次增加

4、(34.78％vs 57.17％vs 61.44％)，經(jīng)檢驗8-細胞與桑椹胚、囊胚均差異顯著(P<0.05)，桑椹胚與早期囊胚之間差異不顯著(P>0.05)；8-細胞、桑椹胚、早期囊胚半胚在三種培養(yǎng)液中的發(fā)育狀況均為DMEM優(yōu)于TCM-199和mPBS，TCM-199優(yōu)于mPBS，除8-細胞胚胎在mPBS中的發(fā)育至囊胚的比率與TCM-199差異不顯著(P>0.05)，其余差異均顯著(P<0.05)。 4 將不同時期分割的半胚置于

5、相同的培養(yǎng)液中：TCM-199培養(yǎng)液中8-細胞分割后的半胚發(fā)育至囊胚的比率顯著低于桑椹胚、早期囊胚分割后半胚發(fā)育至囊胚的比率(分別為22.22％vs 57.38％vs 67.86％，P<0.05)；桑椹胚與早期囊胚半胚發(fā)育至囊胚的比率差異不顯著；DMEM培養(yǎng)液中8-細胞分割后的半胚發(fā)育至囊胚的比率顯著低于桑椹胚、早期囊胚分割后半胚發(fā)育至囊胚的比率(分別為58.33％vs 74.65％vs 85.29％，P<0.05)；桑椹胚與早期囊胚差

6、異不顯著(P>0.05)。 5 本試驗比較了去除粘蛋白層對胚胎分割的影響，結(jié)果表明：桑椹胚、早期囊胚去除粘蛋白層組(+)在分割成功率上顯著高于未去除粘白層組(-)(分別為93.24％vs 80.68％；92.40％vs 80.95％)，經(jīng)檢驗差異均顯著(P<0.05)，但是半胚發(fā)育至囊胚的比率與未處理組(-)相比差異均不顯著(分別為71.01％vs 74.65％；78.82％vs85.29％，P>0.05)。 6 不同分

7、割液對未去除粘蛋白層桑椹胚、早期囊胚分割效果的影響，結(jié)果表明桑椹胚、早期囊胚在0.125M濃度的蔗糖液中分割，其分割成功率均略低于在0.25M濃度的蔗糖液中分割，但桑椹胚、早期囊胚半胚發(fā)育至囊胚的比率兩者差異不顯著(P>0.05)。 7 利用顯微分割和徒手分割的方法對去除粘蛋白層的桑椹胚進行分割，徒手分割的分割成功率略低于顯微分割(93.24％vs 97.62％)，經(jīng)檢驗差異不顯著(P>0.05)。發(fā)育至囊胚的比率徒手分割低于顯