水牛體外受精及胚胎分割的相關(guān)研究.pdf

1、本研究主要探討水牛卵母細(xì)胞體外成熟和受精后早期胚胎的培養(yǎng)程序及水牛卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,為生產(chǎn)更多的優(yōu)質(zhì)胚胎提供保證。同時(shí)還探討了水牛胚胎分割技術(shù),以進(jìn)一步提高胚胎分割的生產(chǎn)效率。本文具體研究內(nèi)容分為如下四個(gè)部分:
　　 研究Ⅰ,探討了在成熟液及培養(yǎng)液中分別添加不同濃度(0μL/mL、5μL/mL、10μL/mL、20μL/mL)的胰島素一轉(zhuǎn)鐵蛋白一硒(insulin,transferrinandselenitim,ITS)

2、對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟及體外受精后早期胚胎發(fā)育的影響。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:(1)在本試驗(yàn)體系下,在成熟液中添加ITS有利于卵母細(xì)胞的體外成熟和受精后早期胚胎的發(fā)育,且以添加10μL/mL的ITS的效果最佳;(2)在本試驗(yàn)培養(yǎng)體系下,在胚胎培養(yǎng)液中添加ITS有利于受精后水牛早期胚胎的發(fā)育,且以添加20μL/mL的ITS的效果最佳。
　　 研究Ⅱ,研究了水牛卵母細(xì)胞成熟前亮甲酚藍(lán)(brilliantcresylblue,BCB)染色對(duì)其體

3、外成熟、體外受精和孤雌激活早期胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果顯示:(1)BCB+組的成熟率(65.70％)要高于對(duì)照組(59.86％),且和控制對(duì)照組(58.42％)、BCB-組(48.86％)差異顯著(P＜0.05);(2)BCB+組的體外受精囊胚發(fā)育率和對(duì)照組差異不顯著,但都顯著高于控制對(duì)照組(20.50％)和BCB-組(8.45％),且這兩組間也差異顯著(P＜0.05)。(3)BCB+組的孤雌囊胚率高于對(duì)照組、控制對(duì)照組,但差異不顯著,BC

4、B-組顯著低于其它各組(P＜0.05)。以上結(jié)果表明:亮甲酚藍(lán)染色可以篩選出發(fā)育完全的卵母細(xì)胞,在一定程度上能挑選出發(fā)育潛力較好的卵母細(xì)胞,但在卵母細(xì)胞的后續(xù)發(fā)育中卻不能顯著提高卵母細(xì)胞的體外生產(chǎn)效率。因此,應(yīng)用BCB染色挑選優(yōu)質(zhì)水牛卵母細(xì)胞的方法還需要進(jìn)行進(jìn)一步深入研究。
　　 研究Ⅲ,探討了水牛卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,以期建立水牛卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,并探討促卵泡素(FSH)和胰島素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài)和凋亡的影響。結(jié)果

5、顯示:水牛顆粒細(xì)胞在體外生長良好,可傳代并保持正常的二倍體核型,成功建立了水牛卵巢顆粒細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型;培養(yǎng)液中添加15μL/mL的FSH和7.5μL/mL的胰島素均能明顯改善體外培養(yǎng)過程中卵巢顆粒細(xì)胞的形態(tài)和降低細(xì)胞發(fā)生凋亡的比率(P＜0.01)。
　　 研究Ⅳ,研究了分割液成份、分割方法及分割胚的冷凍對(duì)水牛分割胚發(fā)育的影響。結(jié)果顯示:(1)三種分割液體10％FCS+TCM液、PBS+0.2MS液和D-PBS+5％PVP的分

6、割成功率、分割胚的囊胚發(fā)育率及囊胚細(xì)胞數(shù)三者均無差異顯著性(P＞0.05),但前兩種液體略顯優(yōu)勢(shì)。(2)徒手分割和顯微切割在分割成功率、分割胚的囊胚發(fā)育率及囊胚細(xì)胞數(shù)三者均無差異顯著性(P＞0.05)。(3)鮮胚和凍胚相比,分割成功率(78.73％、76.43％)、囊胚細(xì)胞數(shù)(52.5、46.3)都較高,但差異不顯著(P＞0.05);在囊胚發(fā)育率方面,鮮胚組(68.27％)顯著高于凍胚組(52.58％)(P＜0.05)。結(jié)果表明:(1)