大腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中胸苷磷酸化酶的表達(dá).pdf

1、研究背景： 胸苷磷酸化酶(TP)是DNA合成過程中的關(guān)鍵酶，已證實(shí)與血小板衍化內(nèi)皮生長因子(PD-ECGF)為同種物質(zhì)，還能在組織內(nèi)轉(zhuǎn)化5’-脫氧氟尿苷(5’-DF(JR)為5-氟尿嘧啶(5-FU)發(fā)揮選擇性細(xì)胞抑制作用。因此TP對(duì)惡性腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及臨床治療均有重要意義。近年的研究普遍認(rèn)為在結(jié)直腸癌組織中TP主要由腫瘤間質(zhì)細(xì)胞特別是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)表達(dá)，組織中TP活性與患者預(yù)后相關(guān)。肝臟是結(jié)直腸癌晚期轉(zhuǎn)移的主

2、要器官，目前國內(nèi)外關(guān)于結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中TP表達(dá)的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)28例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，研究人結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中TP的表達(dá)及其與TAM之間的相互關(guān)系，以及TP陽性細(xì)胞數(shù)與患者預(yù)后之間的關(guān)系。 材料與方法： 1、臨床標(biāo)本：人結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移標(biāo)本28例取自廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院普外科1996年9月至2005年12月的手術(shù)標(biāo)本。其中男性20例，女性8例。年齡最大78歲，最小21歲，平均56

3、歲。其中低分化癌2例，中分化癌24例，高分化癌2例。 2、抗體和試劑盒：一抗采用小鼠抗TP單克隆抗體654-1(1∶800)、小鼠抗TP單克隆抗體抗1C6-203(1∶400)，此2抗體由日本Roche Research Center提供。巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD68的單克隆抗體PG-Ml(1∶lOO)，購自DAKO公司。以小鼠非特異性抗體IgGI(1∶100)為陰性對(duì)照。染色過程中所需的SP-2001試劑盒、二抗試劑盒、DAB試劑盒

4、均購自美國Vector公司。 3、染色結(jié)果的判定及細(xì)胞計(jì)數(shù)方法：654-1和1C6-203抗體的陽性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)棕黃色染色，偶爾也可見到單獨(dú)細(xì)胞核黃染。CD68陽性細(xì)胞染色位于細(xì)胞膜呈鐵銹色。先在低倍視野下選擇5處陽性細(xì)胞最密集區(qū)，然后分別在400倍視野下(0.0625mm<'2>)下進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后分別計(jì)算出每種陽性細(xì)胞的x±s。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Spearman相