甘蔗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的克隆及其表達(dá).pdf

1、UGPase(UDP-glucose pyrophosphorylase，尿甘二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶)是植物糖代謝的主要參與酶之一，在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著重要作用。 本研究以甘蔗(FN95-1702)為材料，通過(guò)RT-PCR，首次克隆得到了甘蔗UGPase基因cDNA片段。該片段長(zhǎng)1495 bp，其中包含的ORF為1431 bp，共編碼476個(gè)氨基酸。將其與NCBI中其它植物的UGPase基因進(jìn)行比對(duì)，與玉米、大麥、綠竹的相

2、似性分別為94％、88％和88％。另外，采用RACE技術(shù)(Rapid Amplification ofcDNA Ends，cDNA末端快速擴(kuò)增)克隆獲得了甘蔗葉UGPase基因cDNA的5'及3'端序列，其中5'端序列長(zhǎng)為91 bp，克隆得到的兩個(gè)3'端片段長(zhǎng)分別為215 bp及316 bp。同時(shí)，提取甘蔗(FN95-1702)葉片的基因組，通過(guò)PCR的方法，克隆得到了甘蔗UGPase基因DNA片段。該片段長(zhǎng)為2617 bp，序列包含1

3、3個(gè)外顯子，其中11個(gè)為完整的外顯子，序列還包含了12個(gè)內(nèi)含子。 將甘蔗UGPase基因cDNA片段連接至載體pBI121，成功構(gòu)建了植物表達(dá)載體。并通過(guò)農(nóng)桿菌的介導(dǎo)，采用浸花法轉(zhuǎn)化擬南芥，經(jīng)抗性篩選及鑒定，初步確定獲得了4棵轉(zhuǎn)基因苗。為進(jìn)一步對(duì)UGPase的相關(guān)功能進(jìn)行研究奠定了基礎(chǔ)。 另外，將甘蔗UGPase基因cDNA片段與原核表達(dá)載體pQE-30相連接，經(jīng)鑒定表明，表達(dá)載體構(gòu)建正確，為下一步的原核表達(dá)研究作好了前