2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、分類號:Q78密級:不保密學(xué)校代碼:10057研究生學(xué)號:12841007a磷酸葡萄糖變位酶基因pgm2的克隆表達及功能研究Cloning,ExpressionandFunctionStudiesofaPhosphoglucomutaseGeneapgm2專業(yè)名稱:指導(dǎo)教師姓名:研究生姓名:申請學(xué)位級別:論文提交日期:論文課題來源:學(xué)位授予單位:生物化學(xué)與分子生物學(xué)王艷萍教授崔月倩理學(xué)碩士2015年03月國家自然科學(xué)基金天津科技大學(xué)摘要

2、本實驗室前期從西藏Kefir粒中分離得到一株具有高產(chǎn)胞外多糖的馬奶酒樣乳桿菌ZW3,該菌具有良好的益生功能,在優(yōu)化的改良MRS培養(yǎng)基中,胞外多糖最高產(chǎn)量達2000mg/L以上,產(chǎn)生的胞外多糖具有較好的理化性質(zhì),是一株可用于食品,醫(yī)藥等多種領(lǐng)域的菌株。本論文以馬奶酒樣乳桿菌ZW3為研究對象,通過前期對其全基因組測序,對得到的結(jié)果進行分析,發(fā)現(xiàn)該菌株含有一個21lMb的環(huán)狀染色體以及兩個大小分別為194,769bp(pWWl)和46,296

3、bp(pWW2)的質(zhì)粒,還發(fā)現(xiàn)在馬奶酒樣乳桿菌ZW3染色體,有一段144kb的胞外多糖基因簇,攜帶17個多糖合成相關(guān)基因,及許多胞外多糖合成通路中的編碼胞外多糖代謝通路中代謝關(guān)鍵酶的管家基因pgm2,gaIEgalK等。為了研究馬奶酒樣乳桿菌ZW3的代謝通路,尋找高效胞外多糖產(chǎn)糖通路,以及構(gòu)建過表達菌株高產(chǎn)胞外多糖,以馬奶酒樣乳桿菌ZW3染色體為模板,利用設(shè)計的引物對代謝管家基因pgm2進行了擴增,構(gòu)建人腸桿菌重組質(zhì)粒pET30apgm

4、2,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中,并成功進行了表達。同時,構(gòu)建構(gòu)建了乳酸菌重組質(zhì)粒pMG36epgm2,轉(zhuǎn)化至馬奶酒樣乳桿菌ZW3菌株中,成功構(gòu)建了過表達菌株,并對馬奶酒樣乳桿菌ZW3野生菌以及其轉(zhuǎn)化菌株進行生長特性分析。針對已經(jīng)轉(zhuǎn)化成功的重組菌株,以野生菌馬奶酒樣乳桿菌ZW3為對照,利用苯酚硫酸法檢測兩者的胞外多糖產(chǎn)量,結(jié)果顯示胞外多糖產(chǎn)量提高了2016%。根據(jù)SDS—PAGE電泳圖譜可初步確定0【一磷酸葡萄糖變位酶基pgm2在大腸桿菌以及馬奶酒

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