枯草芽孢桿菌6-磷酸葡萄糖脫氫酶的分離純化和部分性質(zhì).pdf_第1頁(yè)
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1、枯草芽孢桿菌通過(guò)超聲破壁、(NH<,4>)<,2>SO<,4>分段鹽析、DEAE-Sepharose FF離子交換層析、Blue Sepharose CL-6B親和層析、Sephadex G-200凝膠過(guò)濾等純化步驟,分離出6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PD).經(jīng)PAGE和SDS-PAGE檢測(cè)為單一蛋白區(qū)帶,比活力為1.7375IU/mg,純化倍數(shù)為72.7,收率為13.6﹪.凝膠過(guò)濾法測(cè)定該酶表觀分子量約為220kD,SDS-PAGE測(cè)定

2、亞基分子量約為50.5kD,可見(jiàn)該酶是由四個(gè)相同亞基構(gòu)成的四聚體.等電聚焦電泳測(cè)得等電點(diǎn)為6.3,用動(dòng)力學(xué)方法測(cè)得該酶的最適反應(yīng)pH為8.5,最適反應(yīng)溫度為37℃,以6-磷酸葡萄糖(G6P)為底物的Km值為0.177mmol/L.用常見(jiàn)的熒光淬滅劑丙烯酰胺和KI研究G6PD分子中Trp殘基的微環(huán)境,發(fā)現(xiàn)它們對(duì)分子中Trp殘基的熒光均有淬滅作用,丙烯酰胺能淬滅100﹪的熒光,KI能淬滅78﹪的熒光,表明分子中小部分Trp殘基埋藏在分子內(nèi)部

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