腺苷蛋氨酸誘導(dǎo)肝臟尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活性的機(jī)制研究.pdf

1、新生兒高膽紅素血癥（neonatal hyperbilirubinemia，NHB）是新生兒時(shí)期的常見病，可引起多器官系統(tǒng)損害。盡快降低血清膽紅素水平是治療新生兒高膽紅素血癥的關(guān)鍵。目前臨床常用的治療有光療、換血療法、藥物治療三個(gè)方面的措施，三者各有利弊，故尋找一種能安全、經(jīng)濟(jì)、有效地降低血清膽紅素水平的藥物對(duì)治療新生兒高膽紅素血癥具有突出意義。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶（UDP-glucuronosyltransferase，UGT

2、）是膽紅素結(jié)合的關(guān)鍵酶，可使脂溶性的非結(jié)合膽紅素變成水溶性的結(jié)合膽紅素而排出體外。
　　腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-methionine，SAMe）是體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)，參與體內(nèi)多種重要的生化反應(yīng)，可作為底物參與合成半胱氨酸、?；撬?、谷胱苷肽、輔酶A等重要物質(zhì)，并作為基因供體或酶性誘導(dǎo)劑在人體組織三大代謝過(guò)程中起到轉(zhuǎn)甲基、轉(zhuǎn)硫基和丙氨化(多聚胺合成)作用。該藥應(yīng)用于臨床已有多年，其適應(yīng)證主要針對(duì)肝內(nèi)膽汁郁積、肝炎高膽紅素血癥

3、等黃疸，能有效降低血清結(jié)合膽紅素水平，近年來(lái)國(guó)內(nèi)有報(bào)道稱SAMe輔助治療新生兒高膽紅素血癥有一定療效。因此，我們從分子生物學(xué)的角度，分析SAMe對(duì)人胎肝細(xì)胞（LO2）的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶mRNA表達(dá)和蛋白的生成、活性的影響。
　　第一部分：
　　腺苷蛋氨酸誘導(dǎo)肝臟尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶mRNA表達(dá)的研究
　　目的：
　　分別給予不同濃度、時(shí)間的SAMe干預(yù)LO2細(xì)胞，比較受干預(yù)的LO2細(xì)胞在尿苷二磷酸

4、葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶mRNA水平的變化，探討SAMe對(duì)LO2細(xì)胞UGT的mRNA表達(dá)水平的影響及最佳的干預(yù)條件。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)LO2細(xì)胞，待細(xì)胞約70％鋪滿培養(yǎng)板底部，進(jìn)行分組：⑴SAMe處理組，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果加入SAMe使其終濃度分別為1、0.5、0.1mmol/L；⑵陽(yáng)性對(duì)照組，予以肝酶誘導(dǎo)劑，終濃度為2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可剎米；⑶陰性對(duì)照組，不作加藥處理。加藥培養(yǎng)24h、48h、72h、92

5、h后收集細(xì)胞。通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)各組的mRNA水平。
　　結(jié)果：
　　LO2細(xì)胞的UGT1A1 mRNA經(jīng)一定濃度 SAMe誘導(dǎo)后增加，其中以濃度為0.5mmol/L組最為明顯，該組經(jīng)SAMe誘導(dǎo)24h后細(xì)胞的UGT1A1 mRNA開始增高（49.18±10.16，P<0.05），48h達(dá)到高峰（130.69±9.23，P<0.05），72h后明顯下降（28.25±9.42，P<0.05），此后未見明顯變化；與肝酶誘導(dǎo)劑

6、組比較，其誘導(dǎo)LO2細(xì)胞生成UGT1A1 mRNA的量更多，作用時(shí)間更長(zhǎng)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　適當(dāng)濃度的SAMe對(duì)LO2細(xì)胞的UGT1A1的mRNA表達(dá)有誘導(dǎo)生成作用，表達(dá)量及時(shí)效均比肝酶誘導(dǎo)劑好。
　　第二部分：
　　腺苷蛋氨酸誘導(dǎo)肝臟尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶蛋白表達(dá)的研究
　　目的：
　　分別給予不同濃度、時(shí)間的SAMe干預(yù)LO2細(xì)胞，比較受干預(yù)的LO2細(xì)胞在UGT蛋白表達(dá)及分泌水

7、平的變化，探討SAMe對(duì)LO2細(xì)胞的UGT的蛋白表達(dá)、分泌水平的影響及最佳的干預(yù)條件。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)LO2細(xì)胞，待細(xì)胞約70%鋪滿培養(yǎng)皿底部，進(jìn)行分組：⑴SAMe處理組，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果加入SAMe使其終濃度分別為1、0.5、0.1mmol/L；⑵陽(yáng)性對(duì)照組，終濃度為2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可剎米；⑶陰性對(duì)照組，不加藥處理。加藥培養(yǎng)24h、48h、72h、92h后收集細(xì)胞。通過(guò)western blo

8、t及ELISA檢測(cè)各組的UGT1A1蛋白表達(dá)、分泌水平。
　　結(jié)果：
　　LO2細(xì)胞的UGT1A1蛋白經(jīng) SAMe誘導(dǎo)后合成和分泌增加，其中以濃度為0.5mmol/L組最為明顯，該組經(jīng)SAMe誘導(dǎo)24h后細(xì)胞的UGT1A1蛋白合成和分泌開始增高（49.18±10.16或526.18±5.21，P<0.05），48h達(dá)到高峰（130.69±9.23或1278.22±9.38，P<0.05），72h后明顯下降（28.25±9.4