尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A4(UGT1A4)基因多態(tài)性對拉莫三嗪藥代動力學(xué)的影響.pdf

1、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronosyltransferase，UGT)是重要的二相代謝酶。UGT酶催化尿苷二磷酸葡糖苷酸與化合物結(jié)合形成水溶性更高的結(jié)合物然后排出體外。UGT酶的底物包括一些內(nèi)源性的代謝物，藥物以及從環(huán)境和食物攝入的外源性異物。代謝產(chǎn)物活性降低，也有部分代謝產(chǎn)物的生物活性反而增加。
　　 UGT酶分為四大家族:UGT1、UGT2、UGT3以及UGT8。UGT1和UGT2研究相對廣泛。所有的

2、UGT1A基因家族成員都編碼于人類基因2q37.1上的基因簇。UGT1A基因結(jié)構(gòu)獨特，由13個(UGT1-UGT13)獨有的外顯子1區(qū)域（編碼底物特異性結(jié)合域）以及共用的外顯子2-5（編碼UDPGA結(jié)合域）構(gòu)成。這其中有9個具有功能性多肽分別為:UGT1A1、UGT1A3、UGT1 A4、UGT1 A5、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8以及UGT1A9，另外4個假基因分別為: UGT1 A2、UGT1A11、UGT1A12和UG

3、T1A13。
　　 UGT1A4主要在肝臟、胰腺、小腸、結(jié)腸以及膽囊表達(dá)。UGT1A4催化結(jié)合了許多外源性的胺類和醇類，包括他莫昔芬、皂苷元、三氟拉嗪、丙咪嗪以及拉莫三嗪等。目前已有高加索人群和日本以及韓國人群的UGT1A4基因多態(tài)性分布的研究。功能研究上主要集中在P24T70C＞A和L48VT＞G2個SNP位點，報道能減少體外對二氫睪酮、皂苷元、β-甲萘胺的代謝活性。
　　 拉莫三嗪是一種廣譜的治療癲癇部分性發(fā)作以及全

4、身性發(fā)作的藥物。拉莫三嗪被UGT酶代謝，其中主要的代謝酶為UGT1A4。另外UGT2B7和UT1A1參與了很少部分的代謝。拉莫三嗪主要代謝產(chǎn)物是非活性的2位N上的葡萄糖苷酸化合物，口服給藥后在尿液中排出占75-95％。拉莫三嗪與丙戊酸鈉合用后血藥濃度將顯著降低，而拉莫三嗪與肝藥酶誘導(dǎo)劑合用后的血藥濃度將減少。懷孕以及抽煙也能減少拉莫三嗪的血藥濃度。拉莫三嗪在個體間穩(wěn)態(tài)血藥濃度差異大，在同一個體內(nèi)濃度差異小。目前臨床已開展拉莫三嗪血藥濃度

5、監(jiān)測。UGT1A4基因具有高度多態(tài)性，這些多態(tài)性可能導(dǎo)致酶活性的改變。目前，還沒有UGT1A4基因多態(tài)性在中國人群中的研究，也沒有健康人群中UGT1A4不同基因型對拉莫三嗪藥物代謝動力學(xué)影響的研究。因此，我們研究了中國人群中UGT1A4基因多態(tài)性的分布特點，并研究了UGT1A4基因多態(tài)性對拉莫三嗪藥代動力學(xué)的影響。
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn):
　　 1.在中國人群中總共發(fā)現(xiàn)了13個UGT1A4突變位點，分別為UGT1A4-4

6、57C＞T、-419G＞A、-219C＞T、-163G＞A、-39C＞T、Arg11C＞T、Gly29A＞G、 Leu48T＞G、 His68C＞T、 Leu150T＞C、 Cys157C＞T、Leu208C＞A和Pro268G＞A，基因突變頻率分別為24.2％、24.2％、24.2％、22.4％、1.6％、0.7％、24.3％、0.3％、24.2％、0.7％、0.7％和24.2％。統(tǒng)計共有15種單倍型。突變分布和頻率存在明顯種族差異，

7、連鎖不平衡關(guān)系也存在種族差異。
　　 2.發(fā)現(xiàn)了2個新的突變位點，突變頻率為0.007。采用定點突變技術(shù)構(gòu)建pcDNA3.1（-）重組質(zhì)粒，建立了瞬時轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞重組UGT1A4野生型和Leu208C＞A突變型eDNA表達(dá)體系。HPLC-MS-MS結(jié)果提示UGT1A4 Leu208C＞A突變型和野生型都參與拉莫三嗪的體外代謝，但是二者對拉莫三嗪代謝活性沒有區(qū)別。
　　 3.建立了HPLC-MS-MS測定人血漿中拉