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文檔簡介
1、乙型肝炎病毒(HBV,Hepatitis B Virus)感染是常見的傳染性疾病之一,不僅能引起急、慢性病毒性肝炎,而且與肝纖維化、肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),嚴(yán)重威脅人類的健康。目前,治療乙肝的藥物主要有兩類:干擾素與核苷類似物。干擾素(IFN)是由干擾素誘生劑誘導(dǎo)生物細(xì)胞后所產(chǎn)生的一類高活性多功能的糖蛋白。1976年Greenberg等首先報(bào)道用人白細(xì)胞干擾素治療4例慢性活動(dòng)性乙肝,治療后有2例HBeAg消失。此后,干擾素一直被視為
2、治療乙肝的首選藥物,且在歐洲取得了較滿意的治療效果。在亞洲,僅有20-30[%]的乙肝患者對(duì)干擾素治療敏感。前人報(bào)導(dǎo)干擾素可以調(diào)節(jié)肝細(xì)胞中microRNA-122的表達(dá),且microRNA-122與HBV息息相關(guān)。本文通過Real-time PCR,Nanodrop等方法旨在于研究microRNA-122介導(dǎo)干擾素抗HBV復(fù)制的可能機(jī)制。
首先,通過用IFN-α體外處理Huh7細(xì)胞,qRT-PCR檢測Huh7細(xì)胞中micr
3、oRNA-122表達(dá)量的變化,發(fā)現(xiàn)1000IU/ml IFN-α可以顯著下調(diào)細(xì)胞中microRNA-122的表達(dá)。
其次,本文成功構(gòu)建pSuper-miR-122真核表達(dá)載體。用pSuper-miR-122或miR-122-mimic與pHBV1.3轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)miR-122在體外可以抑制HBV的復(fù)制。同時(shí),用miR-122-inhibitor與HBV1.3轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞,結(jié)果表明miR-122-inhibi
4、tor在Huh7細(xì)胞中具有促進(jìn)HBV復(fù)制的作用。兩項(xiàng)結(jié)果分別從正反面表明:miR-122在體外可抑制HBV的復(fù)制。
再次,為了探求為什么miR-122能抑制HBV,HBV1.3-luci報(bào)告基因與miR-122共轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)miR-122可能作用于HBV-C的5‵非編碼區(qū)。
最后,本研究對(duì)干擾素、HBV與miR-122進(jìn)行了綜合實(shí)驗(yàn)分析,得出miR-122負(fù)向調(diào)節(jié)IFN抗HBV復(fù)制的結(jié)論。這個(gè)結(jié)果對(duì)
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