紫杉醇生物可降解支架對損傷后膽管愈合影響的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開： 第一部分、可降解涂層材料的研發(fā)及紫衫醇涂層生物可降解膽道支架的設計制造 研究目的：研發(fā)一種安全實用的新型可降解高分子聚合物，并設計制造一種以此為涂層材料的紫杉醇生物可降解膽道支架。 研究方法：在浙江大學高分子材料系的協助下，采用單體L—丙交酯(L—LA)和ε—己內酯(ε—CL)為原料，開環(huán)聚合合成共聚物(生物可降解彈性體)，并測定該彈性體的結構表征。將該彈性體與紫杉醇粉末溶于兩者共同的

2、溶劑四氫呋喃中，采用浸泡的方式將之涂于先前制備好的聚乳酸支架上，烘干至恒重。 結果：研發(fā)了一種新型的可降解涂層材料，該產物只在1734cm-1處有單峰吸收，并測得其HNMR譜圖。同時以該可降解聚合物為涂層材料設計制造了紫杉醇生物可降解膽道支架。 結論：研發(fā)并制造了一種全新的紫杉醇生物完全可降解膽道支架。 第二部分、HPLC法測定紫杉醇涂層生物可降解支架體外釋放率 研究目的：建立紫杉醇涂層生物可降解支架體外

3、釋放率HPLC測定法，為紫杉醇膽道支架的體外釋放的藥物動力學研究和藥效學評價提供方法學基礎。同時使用該法測定紫杉醇生物可降解支架體外釋放率。 研究方法：紫杉醇可降解支架置于3mlPBs液中，每日更換PBS液HPLC測得其中紫杉醇含量。采用DCM提取，常溫下吹干，殘渣用移動相溶解，進樣10ul。色譜條件：OSDC18柱，流動相：乙腈—水—甲醇(58：37：5)，流速為1ml/min，檢測波長230nm，貯留時間3.6min．

4、 結果：本法在0.1-30ug/ml間線性良好，相關系數0.9999(n=7)。高中低濃度的3個質控樣本(濃度分別為0.4，2.5，25ug/ml)日內變異率(RSD)分別為：4.65％，1.63％，1.19％，日間變異率(RSD)為：4.65％，2.03％，1.51％，回收率分別為95.54％，98.61％，96.36％。支架30日共釋放紫杉醇含量為281ug，占支架總紫杉醇含量30.4％。 結論：本方法能簡便、準確地測出紫

5、杉醇涂層生物可降解支架體外釋放率。該支架藥物釋放緩慢而持續(xù)。 第三部分、紫杉醇涂層生物可降解支架對豬膽總管吻合口愈合過程的影響 研究目的：觀察紫杉醇涂層生物可降解支架對豬膽總管損傷愈合過程的影響，評價該支架對膽管損傷后瘢痕狹窄形成的防治作用。 研究方法：以巴馬小型豬為實驗對象，構建豬肝外膽管損傷修復模型。30只動物隨機分為兩組，紫杉醇生物可降解支架置入組為實驗組，裸支架置入組為對照組，每組15例。分別于術后1、3

6、及6月處死動物并取材，觀察吻合口愈合情況，測定并比較兩組吻合口直徑、吻合口爆破壓及血肝功能和總膽紅素，觀察兩組吻合口瘢痕纖維增生大體觀、膽道造影情況及組織病理形態(tài)學改變，包括HE染色和Masson染色，并行免疫組化測定吻合口α—SMA和TGF—β1含量。同時電鏡下觀察成纖維細胞、炎細胞等形態(tài)及功能改變，RT—PCR法測定TGF—β1mRNA相對含量并進行組間比較。 結果：所有手術均順利完成，無術中死亡發(fā)生，術后恢復順利，無死亡及

7、明顯膽瘺發(fā)生。兩組動物術后各時間段肝功能及膽紅素值與術前均無明顯差異(p＞0.05)。膽道造影示紫杉醇支架組無明顯膽管擴張現象，紫杉醇支架組術后1、3、6月吻合口直徑均大于裸支架組，其中術后3月與6月差異有統計學意義。HE染色和Masson染色及電鏡結果顯示術后各時段紫杉醇支架組纖維增生情況均比裸支架組輕。免疫組化及RT—PCR法結果顯示紫杉醇組術后1、3、6月α—SMA、TGF—β1陽性細胞評分及TGF—β1mRNA相對含量均比裸支架