SARS-CoV Spike蛋白受體結合結構域在哺乳動物細胞中的表達、純化及功能研究.pdf

1、嚴重急性呼吸綜合征(SARS)是一種新出現(xiàn)的感染性疾病，其致病體為SARS-CoV。SARS能夠導致嚴重急性肺損傷，許多病人惡化為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，具有很高的致死率。此外，受感染者的多個組織、器官受損。SARS具有較高的發(fā)病率、致死率，且傳播速度快，嚴重影響了社會、經(jīng)濟的發(fā)展。 研究表明，Spike(S)蛋白是SARS-CoV表面最重要的結構蛋白，能夠介導病毒與宿主細胞受體的結合和膜融合。同時，它能夠誘導宿主的免疫反應，產(chǎn)

2、生中和抗體。因此，SARS-CoV S蛋白對于確定SARS-CoV的致病機理及疫苗研發(fā)非常重要。由于SARS-CoV的S蛋白本身的編碼序列在哺乳動物細胞中的表達量極低，難以滿足研究需要。為了解決這個問題，SARS-CoV的S蛋白本身的編碼序列被替換為人類基因高頻使用的密碼子，S蛋白得到高量表達，獲得了大量有生物活性的S蛋白。為SARS-CoV S蛋白介導的致病機理的進一步研究和SARS-CoV疫苗的研發(fā)提供了基礎。 SARS-C

3、oV的受體結合結構域(RBD)定位于S蛋白的第319到510位氨基酸(AA319-510)。這段多肽能夠介導病毒與其受體ACE2結合，決定了病毒的宿主范圍和細胞向性。同時，它含有SARS-CoV主要的中和表位，能夠誘導中和抗體。通過人類密碼子優(yōu)化的策略，我們獲得了大量有生物活性的RBD S蛋白。SARS-CoV進入細胞由S蛋白介導。我們的研究表明，RBD S蛋白能單獨通過病毒受體ACE2進入靶細胞。同時，RBD S蛋白N連接的糖基化的去