麥紅吸漿蟲不同滯育蟲態(tài)的RAPD分析.pdf

1、麥紅吸漿蟲Sitodiplosismosellana(Gehin)是北半球小麥生產(chǎn)上一種間歇性大發(fā)生的毀滅性害蟲，廣泛分布于我國各小麥產(chǎn)區(qū)，在歷史上曾多次大發(fā)生，對(duì)小麥生產(chǎn)造成了嚴(yán)重危害。近幾年，仍在局部地區(qū)爆發(fā)成災(zāi)，并具有擴(kuò)大蔓延的趨勢(shì)，是小麥生產(chǎn)上的潛在威脅。但由于紅麥吸漿蟲室內(nèi)飼養(yǎng)難度大，關(guān)于其滯育多態(tài)現(xiàn)象的記載僅見于田間調(diào)查和觀察，缺乏理論上的深入研究，至今尚未見到有關(guān)對(duì)其滯育多態(tài)現(xiàn)象的機(jī)理進(jìn)行明確闡述的研究報(bào)道。RAPD作為一

2、種方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便的分子生物學(xué)技術(shù)，在昆蟲分類學(xué)，物種親緣關(guān)系，系統(tǒng)發(fā)育，有害生物鑒定，害蟲抗藥性診斷和生態(tài)學(xué)等方面的研究中應(yīng)用頗廣。本研究應(yīng)用RAPD技術(shù)對(duì)麥紅吸漿蟲的10種不同滯育蟲態(tài)進(jìn)行了研究，取得的主要結(jié)果如下： 1.小型昆蟲DNA提取往往比較困難。參考多人方法，最終選取Collins(1987)瘧蚊DNA提取方法，此方法能很好且比較穩(wěn)定的提取DNA。 2.根據(jù)分子量Marker(DL2000)，明確麥紅吸漿蟲

3、基因組DNA的大小在25kb左右。 3.優(yōu)化小型昆蟲的RAPD反應(yīng)體系，使其更經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定，該反應(yīng)體積為25μl，由4.0μl10×buffer(含Mg2+)，2.0μldNTPs(各2.5mM)，1.0μlDNA模板，1.0μlTaq酶(1U/μD，1.0μl隨機(jī)引物，16.0μl的超純水組成。 4.應(yīng)用44種隨機(jī)引物對(duì)10種麥紅吸漿蟲滯育蟲態(tài)進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，共篩選出6條隨機(jī)引物S1，S50，S81，S83，S1031

4、，S1248可以對(duì)10種麥紅吸漿蟲滯育蟲態(tài)擴(kuò)增出穩(wěn)定清晰的多態(tài)性片斷(附圖1)。不同引物擴(kuò)出的條帶從0～21條不等，多態(tài)性片斷共計(jì)81條。其中S1擴(kuò)增出19條，S50擴(kuò)增出21條，S81擴(kuò)增出9條，S83擴(kuò)增出8條，S1031擴(kuò)增出13條，S1248擴(kuò)增出11條，相對(duì)分子質(zhì)量在200bp～2000bp之間。 5.從遺傳距離和遺傳相似性系數(shù)以及聚類圖結(jié)果來看，裸露幼蟲之間的遺傳距離比較近，遺傳相似性比較強(qiáng)，親緣關(guān)系比較近；而結(jié)繭幼