C57BL-6J和C3H-HeN小鼠放射性肺損傷進程差異及其機制的研究.pdf

1、目的意義：肺纖維化可由物理、化學(xué)和生物等因素所導(dǎo)致，以膠原沉積增多為特征，臨床表現(xiàn)為進行性呼吸困難乃至呼吸衰竭而死亡。迄今，其分子機制尚未闡明，仍無有效的防治措施。肺纖維化的發(fā)生發(fā)展具有明顯的種屬和個體差異，但存在此種差異的機制仍未揭示。因此，本課題在研究C57BL+/6J和C3H/HeN小鼠RPI進程差異的基礎(chǔ)上，應(yīng)用抗體芯片和組織芯片等技術(shù)，探討其差異存在的機制，尋找肺纖維化易發(fā)相關(guān)分子，并作為該病防治的新靶點，以期進一步揭示該病分

2、子機制并探尋和驗證防治新措施。 材料和方法： (1)20Gy <'60>Coγ射線照射C57BL/6J和C3H/HeN小鼠各30只，于照后1、3和6m，應(yīng)用HE及天狼猩紅染色、免疫組化和組織芯片等方法，檢測Ⅰ和Ⅲ型膠原表達、Hyp和嗜銀蛋白含量以及FN、LN和α-SMA表達。 (2)應(yīng)用抗體芯片檢測C57BL/6J和C3H/HeN小鼠照射前和照射后3m肺組織中蛋白表達的差異。 (3)體外培養(yǎng)兩種小鼠LFs

3、，分別施加2、4、6和8Gyγ，射線及10和30nmol/L Raf1激酶抑制劑I，于照后6h、1、2及3d應(yīng)用MTT、流式細胞術(shù)和免疫熒光細胞化學(xué)等方法檢測細胞增殖活力、細胞周期、嗜銀蛋白、α-SMA、MMP-1和TIMP-1表達。 實驗結(jié)果： (1)C57BL/6J小鼠照后1～6m肺組織病理改變經(jīng)歷問質(zhì)性炎癥、細胞增生和纖維化期，照后3和6m Ⅰ和Ⅲ型膠原沉積和Hyp含量顯著增多，F(xiàn)N于照后1和3m顯著增高，6m減少

4、，LN于照后6m內(nèi)進行性增加，α-SMA于照后3和6m較C3H/HeN小鼠顯著增多；C3H/HeN小鼠照后1～6m肺組織為間質(zhì)性炎癥改變，未見膠原沉積，Hyp含量和FN于照后6m內(nèi)無明顯變化，LN于照后1～3m明顯增強，6m減少。 (2)制備放射性肺損傷組織芯片，HE染色和FN、LN和α-SMA免疫組化染色的結(jié)果同普通切片染色具有良好的一致性。 (3)C3H/HeN小鼠肺組織，于照射前高表達DLP1，照后3m高表達MST

5、3和GSF，T2；C57BL/6J小鼠肺組織，于照后3m高表達Raf1、TRF2和HO1。 (4)2～8Gyγ射線照后3d內(nèi)，C57BL/6J和C3H/HeN小鼠LFs增殖活力無明顯變化。照后C57BL/6J小鼠LFs非整倍體增多，α-SMA高表達，MMP-1表達呈弱陽性，但TIMP-1的表達呈增強趨勢；C3H/HeN小鼠LFs于照后3d內(nèi)見G<,2>/M期阻滯，α-SMA表達減弱，MMP-1和TIMP-1表達均呈增強趨勢。

6、 (5)Raft激酶抑制劑Ⅰ作用于C57BL/6J小鼠LFs后，α-SMA表達減弱，未見非整倍體細胞增多。 結(jié)論： (1)20Gy <'60>Co γ，射線照射成功建立易/抗放射性肺纖維化動物模型。C57BL/6J小鼠為易纖維化小鼠，而C3H/HeN小鼠為抗纖維化小鼠。 (2)建立了放射性肺損傷組織芯片。 (3)Raf1、TRF2和HO1與放射性肺纖維化的發(fā)生呈正相關(guān)，而MST3和GSPT2與放射性肺