β-人絨毛膜促性腺激素在牙齦癌中的表達(dá).pdf

1、目的：牙齦癌是口腔頜面部常見(jiàn)的惡性腫瘤。正常細(xì)胞的增殖分化在體內(nèi)生長(zhǎng)因子、激素及環(huán)境等多種信號(hào)的調(diào)控影響下是一個(gè)嚴(yán)格控制和高度穩(wěn)定的過(guò)程。腫瘤的形成是細(xì)胞無(wú)限增殖的結(jié)果。因此，探討體內(nèi)影響牙齦癌形成的有關(guān)因素，對(duì)闡明牙齦癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制及其有效的防治都具有重要的意義。 人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)是由胎盤(pán)所分泌的糖蛋白激素。與靶細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，主要通過(guò)腺苷酸環(huán)化酶系

2、統(tǒng)刺激甾體類激素的生成，從而對(duì)性細(xì)胞成熟、受精卵著床及妊娠的維持等生理過(guò)程起重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)有研究表明，人絨毛膜促性腺激素(hCG)α、β兩亞基在非生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中存在表達(dá)，且hCG亞基可能與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。α亞單位為hCG非特異的組分，難以作為腫瘤的標(biāo)記物，其主要與激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。β亞基主要和激素與受體的結(jié)合有關(guān)，且與惡性腫瘤自我生長(zhǎng)的調(diào)控功能、腫瘤的轉(zhuǎn)移特性和分化程度、以及與腫瘤微環(huán)境和免疫耐受的形成等都具有密

3、切關(guān)系。為探討牙齦癌中hCGβ亞基的表達(dá)，我們采用免疫組化方法檢測(cè)hCGβ基在牙齦癌變中的表達(dá)情況。 方法：選取存檔的46例牙齦癌和22例正常牙齦組織蠟塊，分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。將每個(gè)蠟塊切為4-5μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張作為陰性對(duì)照，其余1張行β-hCG染色。方法如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；5％H<,2>O<,2>甲醇振洗25分鐘，以封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；微波抗原修復(fù)，92-98℃×15分鐘，室溫冷卻；正常山

4、羊血清封閉，37℃孵育30分鐘；傾去血清，滴加一抗，4℃過(guò)夜；滴加生物素化二抗，37℃孵育25分鐘；滴加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素，37℃孵育20分鐘；最后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。除血清封閉步驟外，以上各步后均以PBS振洗5分鐘×3次。用已知β-HCG陽(yáng)性的絨癌切片做為陽(yáng)性對(duì)照；以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。以細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，以組織中無(wú)明顯陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞為陰性。結(jié)果評(píng)定參照Lorenzolo muzio標(biāo)準(zhǔn)

5、，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野中陽(yáng)性細(xì)胞的百分比，依此將陽(yáng)性表達(dá)又分為：弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10％；陽(yáng)性(++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為10％～50％：強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50％。 用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，免疫組化結(jié)果用X<'2>檢驗(yàn)，出現(xiàn)小值頻數(shù)時(shí)，采用Fisher精確概率法。應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)對(duì)β-hCG表達(dá)情況的相關(guān)性進(jìn)行分析，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、 結(jié)果：1．在正常牙齦組織中，β-hCG未見(jiàn)表達(dá)。在牙齦癌組織中，β-hCG的陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞的胞漿內(nèi)，呈棕黃色顆粒染色。β-hCG在正常牙齦組織中的表達(dá)率為0，在試驗(yàn)組的表達(dá)率為67.39％，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的陽(yáng)性率明顯增高，二者的陽(yáng)性表達(dá)率之間有顯著性差異(P<0.05)。 2．β-hCG的表達(dá)與腫瘤的分化程度相關(guān)，分化程度越低，β-hCG的表達(dá)越明顯(P<0.05)，而與患者的性別、年齡無(wú)明顯的相關(guān)性(P>0.