表皮生長因子及受體調(diào)控洋養(yǎng)層細胞分泌人絨毛膜促性腺激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究.pdf

1、研究目的:1、研究EGF對體外培養(yǎng)早孕絨毛組織HCG分泌的影響及不同孕期滋養(yǎng)層細胞中EGFR的表達.2、研究EGF、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)對人絨毛膜癌JAR細胞分裂增殖、HCG分泌及細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular regulated kinase 1/2,ERK1/2)磷酸化的影響.探討PKC與ERK1/2在EGF調(diào)控JAR細胞增殖和HCG分泌中的作用.研究方法:1、早孕絨毛組織體外培養(yǎng),

2、ELASA法測定不同濃度的EGF對其分泌HCG的影響.2、應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法對不同孕期絨毛組織滋養(yǎng)層細胞EGFR表達進行定位、定量分析.3、不同濃度的EGF、PKC激動劑phorbol 12-myristrate 13-acetate(PMA)急性慢性刺激、PKC抑制劑chelerythrine chlorine(CHEL)作用JAR細胞,MTT還原法測定細胞增殖、ELASA法測定HCG分泌改變.4、EGF、PMA(急性、慢性刺激)

3、、CHEL(chelerythrine)分別刺激JAR細胞,在HCG分泌產(chǎn)生最大效應(yīng)時,Western blot測定細胞內(nèi)磷酸化ERK1/2水平的改變.5、EGF、PMA(急性、慢性刺激)、CHEL聯(lián)合刺激JAR細胞,MTT還原法測定細胞增殖、ELASA法測定HCG分泌及Western blot 測定細胞內(nèi)磷酸化ERK1/2水平的改變.研究結(jié)論:1、EGF具人促進體外培養(yǎng)的絨毛組織分泌HCG,且隨濃度增加其分泌功能增強.2、不同孕期滋養(yǎng)

4、層細胞EGFR表達的強度不同,與孕婦體內(nèi)HCG濃度變化一致,HCG量的變化可能與EGF/EGFR表達有關(guān).3、EGF促進JAR細胞增殖與HCG分泌,且被活化的ERK1/2(磷酸化)所介導(dǎo).PKC參與JAR細胞HCG的分泌活動,活性升高時,下調(diào)ERK1/2磷酸化,使JAR細胞HCG分泌減少;活性降低時,增強ERK1/2磷酸化,JAR細胞HCG分泌量增加.4、PKC參與EGF介導(dǎo)JAR細胞HCG的分泌活動,對EGF介導(dǎo)的細胞增殖影響不明顯.