絨毛膜促性腺激素對人胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞瘦素表達(dá)的影響.pdf

1、目的：瘦素(1eptin,Lp)是一種主要由白色脂肪細(xì)胞分泌的糖蛋白,可能在胎兒發(fā)育中起著非常重要的作用,絨毛膜促性腺激素(hCG)是胎盤分泌的維持妊娠的重要激素,但胎盤分泌的內(nèi)源性hCG與胎盤Lp表達(dá)的關(guān)系目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在從內(nèi)源性和外源性hCG兩個(gè)角度探討人絨毛膜促性腺激素(humanchorionic gonadotropin,hCG)對胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞瘦素表達(dá)的影響,并探討其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及初步探討Lp在胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞中

2、對可能與脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的脂肪細(xì)胞分化相關(guān)蛋白(adipocyte differentiation related protein,ADRP)農(nóng)達(dá)的影響。
　　 方法：取足月?lián)衿谄蕦m產(chǎn)排除妊娠并發(fā)癥的孕婦胎盤,通過改良的Kliman法獲取細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞,體外培養(yǎng)后融合成合體滋養(yǎng)層細(xì)胞,用放射性免疫測定(radioimmunoassay,RIA)方法測定培養(yǎng)液中細(xì)胞分泌的hCG水平;對培養(yǎng)的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行免疫組化染色,觀察Lp蛋

3、白在胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)情況;培養(yǎng)48小時(shí)后細(xì)胞換液,加一定劑量的hCG抗體,抽提RNA和蛋白,通過實(shí)時(shí)定量PCR(qT-RT-PCR)和Western蛋白印跡法檢測內(nèi)源性hCG對Lp mRNA和蛋白的表達(dá)情況;對培養(yǎng)的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞給予一定劑量的重組hCG、cAMP-PKA和p38 MAPK信號傳導(dǎo)通路激活和阻斷藥物forskolin、H89、SB203580及其hCG與這些工具藥的組合等,觀察外源性hCG對Lp RNA的變化及其介

4、導(dǎo)其作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。最后,外源性給予重組Lp,觀察ADRP mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：免疫組織化學(xué)染色顯示,體外培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞可以融合成合體滋養(yǎng)層細(xì)胞,并表達(dá)Lp蛋白;RIA測定結(jié)果表明,培養(yǎng)的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞可以合成內(nèi)源性的hCG;加入hCG抗體,可使Lp mRNA和Lp蛋白表達(dá)下降。不同劑量的hCG抗體引起劑量依賴性的Lp mRNA表達(dá)下降;外源性給予重組hCG后,Lp mRNA表達(dá)進(jìn)一步升高。加入PKA通路激活

5、劑forskolin使Lp mRNA表達(dá)增加,而加入PKA通路抑制劑H89和p38 MAPK抑制劑SB203580都使Lp的表達(dá)下調(diào)。外源性hCG誘導(dǎo)的Lp表達(dá)增加能被H89和SB203580部分阻斷,以H89的阻斷作用更為明顯。外源性給予重組Lp可以使ADRP mRNA的表達(dá)增加,不同劑量的重組Lp引起劑量依賴性的ADRP mRNA表達(dá)增加。
　　 結(jié)論：hCG可以誘導(dǎo)人類胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞Lp mRNA和蛋白的表達(dá),并可能通