芳香烴受體在胎盤(pán)組織的表達(dá)及其對(duì)胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:
　　芳香烴受體(AhR)是一種配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，大量的研究證實(shí)芳香烴受體通過(guò)調(diào)控下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過(guò)程，包括細(xì)胞周期調(diào)控、免疫穩(wěn)態(tài)維持、氧化應(yīng)激反應(yīng)、胎盤(pán)血管的發(fā)育和重塑、生殖等。芳香烴受體在人體多種組織廣泛表達(dá)，在胎盤(pán)的表達(dá)水平尤高，且主要分布于胎盤(pán)合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和胎盤(pán)血管內(nèi)皮細(xì)胞，而胎盤(pán)組織的重要的生物轉(zhuǎn)化酶CYP1A1、CYP1B1皆為其下游靶基因。本實(shí)驗(yàn)收集了孕早期流產(chǎn)的胎盤(pán)組織，孕晚期的正常胎

2、盤(pán)組織和輕度子癇前期胎盤(pán)組織，通過(guò)免疫組織化學(xué)，western bloting，RT-PCR和Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)芳香烴受體及其下游的靶基因CYP1A1和CYP1B1在胎盤(pán)組織的分布及其表達(dá)水平，進(jìn)一步利用芳香烴受體的內(nèi)源性配體ITE及人滋養(yǎng)層細(xì)胞系JEG-3和JAR細(xì)胞研究芳香烴受體對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、遷移的影響。
　　方法:
　　1、取正常（不合并其它疾病，未發(fā)現(xiàn)胎兒染色體異常）妊娠6-8周，行人工流產(chǎn)術(shù)的

3、病人胚胎的絨毛組織，正常足月妊娠和輕度子癇前期病人足月妊娠（孕37周-40周），行擇期剖宮產(chǎn)的胎盤(pán)組織（除去蛻膜和胎膜），即我們的研究對(duì)象。
　　2、通過(guò)免疫組織化學(xué)染色的方法，了解芳香烴受體在孕早期胎盤(pán)組織，正常孕晚期胎盤(pán)組織和子癇前期胎盤(pán)組織中的分布情況。
　　3、通過(guò)Western blotting方法測(cè)定芳香烴受體蛋白在三種組織的表達(dá)情況。
　　4、通過(guò)RT-PCR和Real-time PCR測(cè)定芳香烴受體mR

4、NA，及其下游靶基因CYP1A1和CYP1B1mRNA在早期和晚期胎盤(pán)組織中的表達(dá)水平。
　　5、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)ITE處理前后人滋養(yǎng)層細(xì)胞系JEG-3和JAR細(xì)胞中CYP1A1mRNA水平，確定ITE對(duì)芳香烴受體的激活作用，
　　6、利用結(jié)晶紫染色法檢測(cè)ITE處理前后兩種細(xì)胞的增殖情況，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。
　　7、通過(guò)Transwell的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)ITE處理前后JEG-3和JAR細(xì)胞的遷移情況

5、。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，芳香烴受體在不同孕期的胎盤(pán)組織中均有表達(dá)，且主要分布于合體滋養(yǎng)層細(xì)胞，早期胎盤(pán)組織中細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞無(wú)芳香烴受體表達(dá);早期胎盤(pán)組織中小血管內(nèi)皮細(xì)胞有芳香烴受體表達(dá)，而晚期胎盤(pán)組織中只有少數(shù)大血管內(nèi)皮細(xì)胞有芳香烴受體的表達(dá);芳香烴受體在子癇前期胎盤(pán)組織中的分布與正常胎盤(pán)組織無(wú)明顯差別。
　　2、Western bloting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，晚期胎盤(pán)組織中的芳香烴受體蛋白水平高于早期胎

6、盤(pán)組織，輕度子癇前期胎盤(pán)組織中的芳香烴受體蛋白水平遠(yuǎn)高于正常胎盤(pán)組織。
　　3、RT-PCR和Real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)晚期胎盤(pán)組織中的AhR、CYP1A1、CYP1B1 mRNA水平均高于早期胎盤(pán)組織。
　　4、芳香烴受體在JEG-3和JAR細(xì)胞中的表達(dá)水平不同，JEG-3中表達(dá)量較高，而JAR細(xì)胞中幾乎不表達(dá);在JEG-3細(xì)胞中，ITE通過(guò)激活芳香烴受體促進(jìn)CYP1A1mRNA的表達(dá)。
　　5、ITE抑制J

7、EG-3細(xì)胞的增殖，對(duì)JAR細(xì)胞無(wú)明顯影響;ITE促使JEG-3細(xì)胞停滯于細(xì)胞周期的S期，而對(duì)JAR細(xì)胞的細(xì)胞周期無(wú)明顯影響。
　　6、ITE對(duì)JEG-3和JAR細(xì)胞的細(xì)胞遷移無(wú)顯著影響。
　　結(jié)論:
　　1、芳香烴受體在胎盤(pán)的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其在生長(zhǎng)不同階段表達(dá)的差異很可能與維持胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的分化及激素合成，從而維持正常妊娠密切相關(guān)。
　　2、芳香烴受體可能通過(guò)影響滋養(yǎng)層細(xì)胞的遷移參與子癇前期的發(fā)